雙特異性溶瘤腺病毒Ad-ApoptiN-hTERTp-E1A對乳腺癌的體內(nèi)外抑制作用研究.pdf

1、乳腺癌是全球女性患病率最高的惡性腫瘤，患病人數(shù)龐大并呈持續(xù)增漲態(tài)勢，嚴(yán)重威脅女性的健康和生活質(zhì)量。目前，手術(shù)和放化療仍是乳腺癌治療的主要手段，但是這些方法都各有弊端，難以達(dá)到治愈的目的。隨著分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及病毒學(xué)的發(fā)展，基因治療已成為癌癥治療的新興手段，其中腺病毒載體療法表現(xiàn)出了巨大優(yōu)勢，有望成為乳腺癌治療的可靠方式。
　　本課題組運(yùn)用RAPAd.Ⅰ腺病毒載體系統(tǒng)構(gòu)建了重組腺病毒Ad-Apoptin-hTERTp-E1A(

2、Ad-VT)及對照病毒Ad-hTERTp-E1a(Ad-T)、Ad-Apoptin（Ad-VP3）、Ad-mock，該載體缺失腺病毒基因組骨架的左臂反向末端重復(fù)區(qū)(ITR)、包裝信號及早期區(qū)1基因(E1)，最大程度地降低包裝過程中野生型腺病毒的污染。病毒基因組中巨細(xì)胞病毒(cytomegalovirus，CMV)啟動(dòng)子在上游驅(qū)動(dòng)特異性抑瘤基因Apoptin，使病毒具有特異性溶瘤作用，hTERTp在下游驅(qū)動(dòng)腺病毒5型早期區(qū)1A基因(ear

3、ly region1A，E1a)，使病毒能夠特異性復(fù)制，這樣重組腺病毒Ad-Apoptin-hTERTp-E1a具有了腫瘤特異性殺傷和腫瘤特異性復(fù)制的雙特異性溶瘤作用。
　　MTS實(shí)驗(yàn)、結(jié)晶紫染色實(shí)驗(yàn)檢測Ad-VT對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞、人正常乳腺上皮細(xì)胞MCF-10A的抑制作用，結(jié)果顯示重組腺病毒Ad-VT對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞具有明顯特異性抑制作用，與Ad-mock組相比抑制作用顯著增強(qiáng)(P＜0.05)，抑制作用具有時(shí)效和

4、劑效關(guān)系，而重組腺病毒Ad-VT對人正常乳腺細(xì)胞MCF-10A不具有明顯抑制作用;AO/EB染色實(shí)驗(yàn)、DAPI染色實(shí)驗(yàn)、AnnexinⅤ熒光檢測及流式檢測實(shí)驗(yàn)探討重組腺病毒對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的抑制作用方式，結(jié)果顯示重組腺病毒Ad-VT、Ad-T、Ad-VP3對乳腺癌MCF-7細(xì)胞的抑制作用方式主要是凋亡，且抑制作用具有時(shí)效和量效關(guān)系;劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移及Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)探究重組腺病毒對乳腺癌MCF-7細(xì)胞的

5、遷移及侵襲能力的影響，結(jié)果顯示經(jīng)Ad-VT感染過的乳腺癌MCF-7細(xì)胞，其遷移及侵襲能力受到很大程度的抑制，與Ad-mock組相比差異顯著（P＜0.05），且具有時(shí)效關(guān)系;建立乳腺癌MCF-7細(xì)胞裸鼠皮下種植瘤模型、靜脈轉(zhuǎn)移瘤模型，鼠乳腺癌4T1細(xì)胞BABL/c小鼠皮下種植瘤模型、靜脈轉(zhuǎn)移瘤模型，觀察各重組腺病毒對各模型小鼠抗腫瘤治療作用，結(jié)果顯示雙特異性溶瘤腺病毒Ad-VT能夠明顯延長裸鼠模型動(dòng)物的生存期，抑制BABL/c小鼠皮下種植