堿性成纖維生長(zhǎng)因子對(duì)脂肪干細(xì)胞向血管內(nèi)皮遷移的影響.pdf

1、研究目的：
　　本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谟^察外源性堿性成纖維生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)對(duì)植入小鼠皮下的人脂肪來(lái)源干細(xì)胞(human adipose-derived stem cells，hASCs)-透明質(zhì)酸鈉復(fù)合物中人脂肪來(lái)源干細(xì)胞向血管內(nèi)皮遷移情況的影響，由此探究一種較為理想的軟組織填充方案。
　　材料與方法：
　　由鄭大五附院行脂肪抽吸術(shù)的健康求美者獲得脂肪混懸液，用

2、膠原酶消化混懸液后，從中分離、提取出hASCs，進(jìn)行體外培養(yǎng)、傳代擴(kuò)增，用顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)，用臺(tái)盼藍(lán)染液對(duì)其進(jìn)行染色后行hASCs計(jì)數(shù)，再用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞表型進(jìn)行鑒定。將傳代至第三代的細(xì)胞行成脂誘導(dǎo)，并行油紅O染色對(duì)其進(jìn)行成脂鑒定。用cm-dil標(biāo)記第三代細(xì)胞并在熒光顯微鏡下觀察標(biāo)記后細(xì)胞形態(tài)。取第3代鑒定過(guò)后的hASCs進(jìn)行cm-dil熒光標(biāo)記，標(biāo)記后制成5×109L-1的細(xì)胞懸液。將bFGF配成2mg/L的工作液。將0.25m

3、l透明質(zhì)酸鈉凝膠、0.2ml細(xì)胞懸液和0.05ml含有bFGF的工作液混合制成實(shí)驗(yàn)組植入物，同時(shí)將0.25ml透明質(zhì)酸鈉凝膠、0.2ml細(xì)胞懸液和0.05mlDMEM對(duì)照液混合制成對(duì)照組植入物，將實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組分別植入小鼠背部左、右兩側(cè)皮下，每只小鼠均作自身對(duì)照。6周后取材，觀察局部注射物吸收情況及組織大體形態(tài)，蘇木精-伊紅染色后觀察組織學(xué)形態(tài)，免疫熒光標(biāo)記后熒光顯微鏡下觀察血管內(nèi)皮熒光及外源性人脂肪來(lái)源干細(xì)胞示蹤熒光。觀察并記錄實(shí)驗(yàn)組

4、、對(duì)照組同一視野FITC標(biāo)記血管內(nèi)皮的綠色熒光和cm-dil標(biāo)記外源性人脂肪來(lái)源干細(xì)胞的紅色熒光的重合例數(shù)，并行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析比較兩組差異。
　　結(jié)果：
　　1.提取并傳代培養(yǎng)的人脂肪來(lái)源干細(xì)胞光鏡下形態(tài)為梭形，流式細(xì)胞儀檢測(cè)其表型符合人脂肪來(lái)源干細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)，行成脂誘導(dǎo)后7天可在鏡下觀察到大小不一的脂滴，油紅O染色結(jié)果為陽(yáng)性。經(jīng)cm-dil標(biāo)記后，熒光顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞顯紅色熒光，呈梭形。
　　2.攜帶外源性人脂肪來(lái)源干細(xì)胞的

5、實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組復(fù)合物植入小鼠體內(nèi)后未見(jiàn)排異反應(yīng)。術(shù)后6周剪開背部皮膚，見(jiàn)雙側(cè)植入處均無(wú)結(jié)節(jié)、壞死、液化，無(wú)明顯凝膠狀物殘留，雙側(cè)軟組織質(zhì)地?zé)o顯著差別。
　　3.蘇木精-伊紅染色后鏡下可見(jiàn)兩組標(biāo)本性質(zhì)主要為脂肪組織和疏松結(jié)締組織，并可觀察到血管和肌肉組織。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組標(biāo)本經(jīng)蘇木精-伊紅染色后組織成分鏡下未見(jiàn)明顯差異。
　　4.熒光顯微鏡綠色光源下可見(jiàn)顆粒狀聚集或條帶狀沉積的紅色明亮熒光，藍(lán)色光源下可見(jiàn)血管內(nèi)皮細(xì)胞呈綠色熒光，

6、形態(tài)多為血管斷面。綠色光源下隨機(jī)選取標(biāo)記外源性人脂肪來(lái)源干細(xì)胞的紅色熒光，切換藍(lán)色光源觀察有否標(biāo)記血管內(nèi)皮的綠色熒光與之重合，結(jié)果兩組重合例數(shù)實(shí)驗(yàn)組大于對(duì)照組，卡方值x2=4.53，自由度v=1，P＜0.05，差異有顯著性意義。
　　結(jié)論：
　　將堿性成纖維生長(zhǎng)因子加入人脂肪來(lái)源干細(xì)胞-透明質(zhì)酸鈉支架復(fù)合物中植入小鼠體內(nèi)后，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子可促進(jìn)植入物中的外源性人脂肪來(lái)源干細(xì)胞向血管內(nèi)皮遷移，參與血管的構(gòu)建及新生，加強(qiáng)