過表達(dá)AMACR促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖及作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：AMACR是一種胞漿蛋白，主要存在于人類過氧化物酶體和線粒體中，參與側(cè)鏈脂肪酸及脂肪酸衍生物的β氧化和在膽酸代謝中間產(chǎn)物的氧化過程中發(fā)揮重要作用，它的高表達(dá)對(duì)腫瘤的增殖具有積極的促進(jìn)作用，但這一結(jié)論在肝癌中尚未被證實(shí)。本課題組將采用無標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析過表達(dá)AMACR對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的作用機(jī)制。
　　方法：應(yīng)用AMACR過表達(dá)的慢病毒載體對(duì)肝癌細(xì)胞株HepG2進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)，建立AMACR穩(wěn)定過表達(dá)細(xì)胞株，通過CCK-8試驗(yàn)

2、檢測(cè)過表達(dá)AMACR對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響。然后提取 AMACR過表達(dá)細(xì)胞株全蛋白，進(jìn)行無標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究。對(duì)鑒定結(jié)果用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法篩選出差異表達(dá)蛋白，并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析和利用熒光定量PCR方法對(duì)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建了AMACR過表達(dá)肝癌細(xì)胞株，CCK-8試驗(yàn)結(jié)果顯示過表達(dá) AMACR能夠促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖。應(yīng)用無標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法，共篩選出138個(gè)差異表達(dá)蛋白，其中上調(diào)蛋白124個(gè)，下調(diào)蛋白14個(gè)。這些