皮質(zhì)脊髓投射神經(jīng)元的在體分離與基因表達(dá)分析.pdf

1、目的:哺乳動(dòng)物的大腦皮層接受、整合來(lái)自身體各處的感覺(jué)信息,并依靠第五皮層的下行性投射神經(jīng)元將控制信息傳遞出去。來(lái)自不同區(qū)域的第五皮層投射神經(jīng)元其下行性投射靶區(qū)是不同的。視覺(jué)區(qū)的下行性投射神經(jīng)元投射到上丘,運(yùn)動(dòng)區(qū)則投射到脊髓。上述的這種現(xiàn)象是由于出生后軸突的選擇性修剪引起的。本研究是為了尋找皮質(zhì)脊髓投射神經(jīng)元(CSPN)發(fā)育的關(guān)鍵基因,嘗試建立一種在體分離投射神經(jīng)元和基因表達(dá)分析的方法。
　　 方法:我們?cè)赑8小鼠椎體交叉處注射逆

2、行標(biāo)記物,用來(lái)標(biāo)記第五皮層的下行性投射神經(jīng)元。同時(shí)用顯微捕獲激光切割的方法對(duì)視覺(jué)區(qū)和運(yùn)動(dòng)區(qū)的投射神經(jīng)元進(jìn)行分離。分別提取RNA,通過(guò)線性放大后,對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制。對(duì)于質(zhì)量合格的RNA,送去上海做基因芯片實(shí)驗(yàn),通過(guò)對(duì)CSPN表達(dá)譜以及皮層組織表達(dá)譜的對(duì)比分析,尋找特異性表達(dá)在CSPN的基因。
　　 結(jié)果:我們發(fā)現(xiàn)有很多個(gè)基因在純化的CSPN上富表達(dá)。如遺傳痙攣性截癱病變基因Spg3a與印記基因Meg8。對(duì)于這一結(jié)果我們也通過(guò)RT-