攜帶blaNDM-1基因腸桿菌科細(xì)菌的耐藥基因及其同源性研究.pdf

1、目的：探討臨床分離的對(duì)碳青霉烯酶類抗菌藥物耐藥的腸桿菌科細(xì)菌的耐藥表型、基因型和菌株之間的同源性，為醫(yī)院感染的控制和預(yù)防提供指導(dǎo)。
　　方法：收集臨床分離的對(duì)碳青霉烯酶類抗菌藥物耐藥的3株肺炎克雷伯菌和16株雷極普羅威登菌，共19株；采用法國(guó)梅里埃Vitek2 Compact系統(tǒng)對(duì)細(xì)菌進(jìn)行鑒定和藥敏；改良Hodge試驗(yàn)和亞胺培南-EDTA E-test條法（金屬酶，MBL）初步篩查菌株是否產(chǎn)金屬酶；聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)菌株是否攜帶產(chǎn)碳

2、青霉烯酶基因、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶基因、AmpC酶基因、喹諾酮耐藥相關(guān)基因和磷霉素耐藥基因(fosA3)，并通過測(cè)序確定基因型；多位點(diǎn)序列分型（MLST）和脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)分析菌株的同源性；質(zhì)粒接合和Southern雜交試驗(yàn)分析攜帶blaNDM-1質(zhì)粒的特性。
　　結(jié)果：19株菌Hodge試驗(yàn)和金屬酶E條試驗(yàn)均呈陽(yáng)性，且均攜帶多個(gè)耐藥基因,呈現(xiàn)多重耐藥。3株肺炎克雷伯菌均攜帶blaNDM-1、bla TEM-1、fosA3

3、、oqxA和oqxB基因,而接合子攜帶blaNDM-1、bla TEM-1和fosA3基因。16株雷極普羅威登菌中，7株接合成功的原代菌和接合子均攜帶blaNDM-1、aac（6′）-Ⅰb和bla TEM-116基因，而另外接合試驗(yàn)不成功的9株僅攜帶blaNDM-1、和bla TEM-116基因。脈沖場(chǎng)凝膠電泳顯示：3株肺炎克雷伯菌的帶型完全一致，屬于同一克隆，且MLST分型都是ST22；16株雷極普羅威登菌中，11株菌條帶數(shù)目和位置完

4、全一致，與另外5株菌的差異只有1～2個(gè)條帶，提示院內(nèi)存在克隆的流行。質(zhì)粒接合、分型和Southern雜交試驗(yàn)結(jié)果顯示肺炎克雷伯菌和雷極普羅威登菌攜帶blaNDM-1基因的質(zhì)?？梢酝ㄟ^接合方式轉(zhuǎn)移到受體菌(E.coliJ53AziR)，兩者的質(zhì)粒大小分別是220000bp和130000bp,且質(zhì)粒分型都屬于IncA/C型。
　　結(jié)論：經(jīng)檢索，同時(shí)攜帶blaNDM-1、bla TEM-1、fosA3、oqxA和oqxB基因的ST22型