多重耐藥鮑曼不動桿菌主要β-內(nèi)酰胺酶基因型及同源性研究.pdf

1、鮑曼不動桿菌是目前引起醫(yī)院內(nèi)感染的重要病原菌。隨著廣譜抗菌藥物的廣泛應(yīng)用，多重耐藥的鮑曼不動桿菌比例不斷上升，并在全球多處的重癥監(jiān)護病房發(fā)生爆發(fā)流行，成為抗感染治療的棘手問題。根據(jù)美國院內(nèi)感染監(jiān)測數(shù)據(jù)(NNIS)以及中國院內(nèi)感染病原菌調(diào)查顯示，不動桿菌屬在醫(yī)院內(nèi)感染中占第4位，成為僅次于銅綠假單胞菌的又一個重要的非發(fā)酵病原菌。自1991年美國首例碳青霉烯類耐藥的不動桿菌屬(CRA)報道以來，世界各地陸續(xù)出現(xiàn)此類菌株。近兩年來，CRA已成

2、為國際社會討論的熱點話題之一。因為一旦亞胺培南耐藥，就意味著對現(xiàn)有的常用廣譜抗菌藥物均耐藥，即泛耐藥株(PDRA)。由PDRA引起的感染，常常無藥可用，病死率高。 不動桿菌的耐藥機制復(fù)雜，包括產(chǎn)生滅活酶，使抗菌藥物失活；改變作用靶部位，從而逃避抗菌藥物的作用；改變外膜孔蛋白結(jié)構(gòu)和數(shù)量，降低了細(xì)菌外膜藥物的通透性；激活外排泵系統(tǒng)，進一步降低了細(xì)菌胞內(nèi)抗菌藥物的濃度等。近年來山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院不動桿菌尤其是鮑曼不動桿菌的分離率不斷

3、增加，耐藥率也不斷上升，本研究篩選2007年7月到2008年5月臨床分離的多重耐藥鮑曼不動桿菌，并對其耐藥性、同源性及主要β—內(nèi)酰胺酶基因型進行研究。 1、多重耐藥鮑曼不動桿菌的篩選及耐藥性研究 菌株來源：連續(xù)收集山西醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院2007年7月到2008年5月臨床分離的多重耐藥鮑曼不動桿菌菌株。 方法：采用K—B紙片法，以大腸埃希菌ATCC25922、鮑曼不動桿菌ATCC19606為質(zhì)控菌，篩選多重耐藥不

4、動桿菌。采用瓊脂稀釋法測定12種抗菌藥物的MIC值?？咕幬锝Y(jié)果按2007年CLSI標(biāo)準(zhǔn)判定。 結(jié)果：篩選出60株多重耐藥鮑曼不動桿菌，它們對12種抗菌藥物的抗菌活性中，亞胺培南、美羅培南的耐藥率分別為45.2％、33.9％，含酶抑制劑的復(fù)合制劑頭孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率分別為33.3％、59.0％，米諾環(huán)素和多粘菌素E分別為16.1％、9.7％，其它抗菌藥物的耐藥率均在70％以上。 2、多重耐藥鮑曼不

5、動桿菌同源性研究 菌株來源：連續(xù)收集山西醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院2007年7月到2008年5月臨床分離的多重耐藥鮑曼不動桿菌菌株。 方法：利用脈沖場凝膠電泳(PFGE)技術(shù)對我院多重耐藥鮑曼不動桿菌進行同源性研究，并對其流行情況、克隆分型進行了分析。 結(jié)果：60株菌株可分為5個克隆株，其中A、B為主要克隆株。A克隆有3個亞型共28株， B克隆有1個亞型共9株， C克隆有2個亞型共4株， D、E各有3和2株，另外還有1

6、4株散發(fā)菌株?？寺≈暝诓》績?nèi)、病房間傳播成為我院鮑曼不動桿菌分離率上升，菌株不斷增加的主要原因。 3、多重耐藥鮑曼不動桿菌主要β—內(nèi)酰胺酶基因型研究 菌株來源：連續(xù)收集山西醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院2007年7月到2008年5月臨床分離的多重耐藥鮑曼不動桿菌60株。 方法：利用三維實驗、雙紙片協(xié)同實驗，進行各種β—內(nèi)酰胺酶檢測。 利用PCR擴增、序列分析明確β—內(nèi)酰胺酶基因型，PCR擴增主要β—內(nèi)酰胺酶編碼基因

7、包括：①ESBLs基因：TEM型、SHV型、PER型、CTX—M-1型、CTX—M-9型、GES型、VEB型；②染色體攜帶的AmpC酶基因：ADC；③碳青霉烯酶基因：OXA-23型、OXA-24型、OXA-58型、IMP型、VIM型、SIM-1。 接合實驗、質(zhì)粒抽提、電轉(zhuǎn)化等明確β—內(nèi)酰胺酶基因定位。 結(jié)果：三維實驗陽性，提示菌株可能產(chǎn)β—內(nèi)酰胺酶。 60株多重耐藥鮑曼不動桿菌PCR擴增后，blaTEM基因陽性的

8、有42株，blaPER有20株陽性，2株菌株攜帶SHV-2基因；1株菌株CTX—M-1組引物擴增得到陽性產(chǎn)物，序列分析證實為blaCTX—M-3；blaADC1-7基因陽性的有57株，blaADC8基因陽性的有2株；blaOXA-23基因陽性的有15株。 對產(chǎn)CTX—M-3型ESBLs的菌株成功進行接合試驗，并對其原始菌和接合菌抽提了質(zhì)粒，國內(nèi)未見相關(guān)報道。產(chǎn)SHV型的兩株菌株雖然成功抽提了質(zhì)粒，但接合實驗雖進行多次仍未成功，轉(zhuǎn)

9、化實驗也未成功。其它菌株反復(fù)多次接合試驗、抽提質(zhì)粒以及電轉(zhuǎn)化均未成功。 以上研究表明： 1、我院鮑曼不動桿菌多重耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重，對多粘菌素E的耐藥率最低，對頭孢哌酮/舒巴坦的耐藥率相對較低。 2、我院多重耐藥的鮑曼不動桿菌的分離率較高，達34％；菌株可分為5個克隆株，其中A、B為主要克隆株。提示我院有多重耐藥鮑曼不動桿菌小型爆發(fā)流行的可能，因此，控制院內(nèi)感染至關(guān)重要。 3、表型檢測顯示所有菌株金屬酶檢測試驗

10、陰性；頭孢曲松、頭孢西丁三維實驗提示菌株產(chǎn)β—內(nèi)酰胺酶。 4、我院多重耐藥鮑曼不動桿菌主要的ESBL基因型是blaTEM和blaPER，同時檢測到SHV型基因；碳青霉烯酶基因型為blaOXA-23，全部為CARB，提示我院的β—內(nèi)酰胺酶的基因型分布與國內(nèi)其他地區(qū)的分布情況存在很大差異。 5、我院多重耐藥的鮑曼不動桿菌同產(chǎn)多種β—內(nèi)酰胺酶基因型的菌株較多，提示臨床治療應(yīng)針對這種耐藥分布合理選用抗菌藥物。 6、對產(chǎn)C