間歇性低壓低氧對大鼠肺動脈高壓預防作用的免疫調節(jié)機制.pdf

1、目的:肺動脈高壓(Pulmonary arterial hypertension，PAH)是以肺動脈壓力升高以及血管痙攣、內膜增生和重構為主要特征的一種疾病。其主要的病理變化是受損的肺動脈血管內皮細胞以及增生的平滑肌細胞引起的血管重構，組織學研究表明，肺動脈周邊存在肥大細胞、巨噬細胞、T淋巴細胞、B淋巴細胞及樹突狀細胞等炎癥細胞及其釋放出的趨化因子、黏附分子和細胞因子，最終使得肺血管組織的內皮受損和平滑肌細胞增殖[1]。證明肺動脈高壓的

2、發(fā)生發(fā)展中，免疫系統(tǒng)的紊亂參與其中。近些年，大量基礎研究表明，間歇性低壓低氧(intermittent hypobaric hypoxia，IHH)可影響免疫應答的性質和強度，減低免疫性疾病的發(fā)生與發(fā)展，提高免疫力。間歇性低氧包括常壓低氧和低壓低氧，常壓低氧方式可對機體是不利的。大量的研究表明，間歇性低壓低氧的環(huán)境對機體組織低氧的耐受性對多種器官、組織以及提高機體免疫力方面均明顯表現(xiàn)出有益的方面，能提高機體缺血、缺氧的耐受性，對缺血導致

3、的心功能受損、心律失常其保護作用，對神經(jīng)、腎臟、肝臟等重要組織器官產(chǎn)生有益的影響，此外還具有降壓作用[2，3]。本研究旨在通過肺動脈高壓動物模型，給予CIHH處理，利用免疫組化、ELISA等方法，從動物整體、離體組織及細胞不同水平，系統(tǒng)地觀察IHH預處理對肺動脈高壓的影響，并深入探討其免疫學機制。
　　方法:
　　1、建立模型:SD(Sprague Dawley)大鼠40只，購于河北醫(yī)科大學實驗動物中心，體重150-200g

4、，并飼養(yǎng)在河北醫(yī)科大學生理教研室的無病原菌的動物房中，定期更換墊料及鼠食。隨機分為4組，正常對照組10只，(Control組)，MCT腹腔注射組10只(60 mg/kg)，IHH處理組10只，IHH+MCT組10只。
　　MCT組:SD大鼠采用野百合堿(Monocrotaline，MCT)以60mg/kg劑量一次性腹腔注射，以誘導大鼠慢性PAH模型在注射14天后用將頭端改良的PE-50管檢測右心室收縮壓(Right heart s

5、ystolic pressure，RVSP)及肺動脈壓力，以鑒定慢性PAH大鼠模型。
　　IHH組:SD大鼠置于低壓低氧艙內，接受模擬5000米海拔高度(PB=525mmHg，PO2=108.8mmHg，O2濃度11.1％，大氣壓400mmHg)的低壓低氧處理，每天6小時，其余時間仍處在正常氧氣及氣壓條件，連續(xù)經(jīng)受28d的間歇性低氧。
　　IHH+MCT組:SD大鼠置于低壓低氧艙內，接受模擬5000米海拔高度(PB=525m

6、mHg，PO2=108.8mmHg，O2濃度11.1％，大氣壓400mmHg)，每天6h的低氧處理，其余時間仍處在正常氧氣及氣壓條件，連續(xù)經(jīng)受28d的間歇性低氧后采用MCT以60mg/kg劑量一次性腹腔注射，以誘導大鼠慢性PAH模型，在注射14天后用將頭端改良的PE-50管檢測右心室收縮壓(Right heart systolic pressure，RVSP)及肺動脈壓力。
　　2、大鼠肺動脈高壓變化:用右心導管法測定大鼠平均肺動

7、脈壓(meanpulmonary artery pressure,mPAP)。
　　3、采用高保真彩色圖像分析系統(tǒng)對肺組織切片的TNF-α和IL-6表達強度進行定量分析。
　　4、采用ELISA方法檢測血清中TNF-α、IL-16含量。
　　結果:
　　1、成功建立大鼠PAH模型:MCT腹腔注射組大鼠mPAP明顯升高(44.26±3.24)mmHg，與對照組比較差異具有統(tǒng)計學意義[(16.68±0.78)mmHg

8、,P＜0.01]。
　　2、IHH+MCT大鼠PAH發(fā)生率(20％)明顯低于MCT組大鼠(90％);IHH與CON間PAH發(fā)生率無明顯變化。
　　3、肺組織中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白介素-6(IL-6)蛋白表達變化
　　肺組織免疫組化染色顯示，與MCT組比較，IHH組大鼠肺組織TNF-α、IL-6表達明顯減低(P＜0.05）;與Control組比較，MCT組TNF-α、IL-6明顯升高(P＜0.01)，IHH

9、組TNF-α、IL-6也升高，但與Control組無顯著性差異（P＞0.05）;與MCT組比較IHH+MCT組大鼠肺組織TNF-α、IL-6表達明顯下降（P＜0.05）;與Control組比較IHH+MCT組TNF-僅、IL-6表達與Control組無顯著性差異（P＞0.05）。
　　4、血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)蛋白表達變化
　　與MCT組比較，IHH組大鼠血清中TNF-α、IL-6表達明顯

10、減低(P＜0.05);與Control組比較，MCT組TNF-α、 IL-6明顯升高(P＜0.01)，IHH組TNF-α、IL-6也升高，但與Control組無顯著性差異（P＞0.05）;與MCT組比較IHH+MCT組大鼠血清TNF-α、IL-6表達明顯下降(P＜0.05），與Control組比較IHH+MCT組TNF-α、IL-6表達與Control組無顯著性差異（P＞0.05）。
　　結論:
　　1、成功制備MCT誘導大