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1、宇佐美曲霉(Aspergillus usamii木聚糖酶(XynII)是G/11家族高比酶活木聚糖酶的一種,來源于Thermomonospora fusca的木聚糖酶(TfxA)也屬于G/11家族的耐高溫木聚糖酶。本研究以XynII為母體通過與TfxA N端替換擬提高XynII的耐熱性。結(jié)果表明,N端替換后的重組蛋白XynIIAB失去了木聚糖酶活性;比較XynII、TfxA和XynIIAB的三維結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)XynII和TfxA空間位置第6
2、位氨基酸殘基都是芳香族氨基酸(Tyr或Phe),但在XynIIAB中失去了這一空間位置。為考察第6位芳香族氨基酸對酶活性的影響,設(shè)計實驗將XynII第6位酪氨酸定點突變?yōu)榻z氨酸(Ser)。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),突變后的重組蛋白XynIIY6S同樣無木聚糖酶活性;進(jìn)一步對已報道的20種G/11家族木聚糖酶進(jìn)行三維建模,發(fā)現(xiàn)它們在上述的空間位置都是芳香族氨基酸。由此可見,XynII無論是N端替換或定點突變,由于均失去了空間位置上保守的Tyr或Phe
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