紅景天苷對PI3K-AKT-Gsk3-β介導的H9C2細胞缺血再灌注損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、目的:研究紅景天苷對H9C2細胞缺血再灌注損傷的保護作用和可能機制，為中醫(yī)藥在心肌缺血/再灌注損傷的防治中發(fā)揮更大的作用提供客觀依據(jù)。
　　方法:將H9C2細胞株接種至細胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，后取對數(shù)生長期細胞進行相關指標的檢測。實驗過程中，細胞分為以下4組:正常對照組(CON)組、缺氧/復氧組(I/R)組、缺氧/復氧+紅景天苷(I/R+S)組、缺氧/復氧+紅景天苷+LY294002(I/R+S+LY294002)組。①CON組:細胞置

2、于37℃、21％O2、5％CO2的正常培養(yǎng)箱中孵育24h后進行相關指標檢測;②I/R組:用缺氧培養(yǎng)液替換正常培養(yǎng)基(10％DMEM)后置于三氣培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16h后，把缺氧液換為10％DMEM置于正常培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8h后，進行相關指標檢測;③I/R+S組:在換缺氧培養(yǎng)液的同時加入20ul(200ug/ml)紅景天苷組，余步驟同I/R組;④I/R+S+LY294002組:在I/R+S的基礎上加入PI3K通道阻滯劑LY294002，阻滯劑在加紅

3、景天苷前30min加入，余步驟同I/R組。經上述處理后，用MTT法檢測藥物對細胞增殖的影響;檢測培養(yǎng)液中活性氧(ROS)水平、細胞內外乳酸脫氫酶(LDH)含量來評估細胞的損傷程度;用WesternBlot法測定細胞內磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶-3(GSK3-β)蛋白表達水平和磷酸化狀態(tài)。
　　結果:1.MTT法檢測抑制率組間比較:①I/R、I/R+S、I/R+S+LY294002三組抑制

4、率均顯著高于CON組（P＜0.05）;②I/R顯著高于I/R+S組（P＜0.05）;③I/R+S組顯著低于I/R+S+LY294002組（P＜0.05）。
　　2.LDH含量組間比較:①細胞外LDH含量I/R+S組顯著低于I/R組(P＜0.05)，細胞內LDH含量則顯著高于I/R組(P＜0.05);②細胞外LDH含量I/R+S組顯著低于I/R+S+LY294002組，細胞內LDH含量則顯著高于I/R+S+LY294002組（P＜0

5、.05）;③細胞外LDH含量I/R+S+LY294002組與I/R組無顯著差異(P＞0.05)，細胞內LDH含量I/R+紅景天苷+LY294002組略高于I/R組。
　　3.ROS含量組間比較:①I/R+S組顯著低于I/R組（P＜0.05）;②I/R+S組顯著低于I/R+S+LY294002組（P＜0.05）;③I/R+S+LY294002組與I/R組ROS含量無顯著差異(P＞0.05)。
　　4.Akt磷酸化(p-Akt)

6、蛋白的表達組間比較:①I/R組與CON組比較有所增加，差異具統(tǒng)計學意義(P＜0.05);②I/R+S組與I/R組相比，p-Akt明顯增加(P＜0.05);③I/R+S+LY294002組明顯低于I/R+S組(P＜0.05)。
　　5.GSK3-β磷酸化(p-GSK3-β)蛋白表達組間比較:①I/R組與CON組比較有所增加，差異具統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;②I/R+S組與I/R組比較p-GSK3-β明顯增加（P＜0.05）;③I/