HDAC3在H9C2細(xì)胞缺血再灌注損傷中的表達(dá)及TSA干預(yù)機(jī)制.pdf

1、目的：
　　缺血-再灌注損傷（ischemia reperfusion injury，I/R）是指部分組織細(xì)胞經(jīng)歷了此階段，恢復(fù)血流和氧供后，組織損傷卻更為加重，發(fā)生組織結(jié)構(gòu)破壞和功能代謝障礙的不可逆損傷現(xiàn)象，但發(fā)病機(jī)制尚不清楚。組蛋白去乙?；福℉istone deacetylase, HDACs）參與IR發(fā)病過(guò)程。HDACs可將基因的表達(dá)激活，調(diào)控染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)，使組蛋白去乙?；?，去乙?；瘎t在轉(zhuǎn)錄阻遏過(guò)程中起作用，不同亞

2、型的HDACs發(fā)揮不同的功能作用。曲古霉素A（Trichostatin A, TSA）作為HDACs的抑制劑，是被發(fā)現(xiàn)的第1個(gè)能抑制HDAC活性以及已知最為有效的化合物。本實(shí)驗(yàn)探究HDAC3在細(xì)胞缺血再灌注損傷中的作用，TSA通過(guò)調(diào)控干預(yù)H9C2心肌細(xì)胞IR損傷中的表達(dá)，并進(jìn)行HDAC3部分機(jī)制研究，為臨床防治再灌注損傷提供新思路和新的研究途徑。
　　方法：
　　選取SD大鼠H9C2細(xì)胞株進(jìn)行研究，置于正常培養(yǎng)箱中，選取對(duì)數(shù)

3、生長(zhǎng)期細(xì)胞，采用EDTA胰酶液制成細(xì)胞懸液后，進(jìn)行細(xì)胞傳代和接種。本實(shí)驗(yàn)分為以下3組：①正常對(duì)照組、②缺血/再灌注(I/R)組、③缺血/再灌注(I/R)+TSA組；參閱相關(guān)文獻(xiàn)，模擬心肌細(xì)胞I/R過(guò)程，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。根據(jù)以上分組，每組各設(shè)6個(gè)復(fù)孔。將H9C2心肌細(xì)胞以1×104/孔的密度接種于96孔板，待細(xì)胞貼壁3 h后吸出培養(yǎng)液，正常對(duì)照組、I/R組、I/R+TSA組每孔各加入200μL DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液，各組細(xì)胞經(jīng)處理后繼續(xù)培養(yǎng)。MT

4、T法檢測(cè)H9C2細(xì)胞增殖活力；檢測(cè)培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)水平；Western Blotting法測(cè)定H9C2細(xì)胞內(nèi)HDAC3蛋白表達(dá)水平；實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)H9C2細(xì)胞HDAC3 mRNA表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示:與正常對(duì)照組相比較，I/R組、I/R+TSA組抑制率均顯著提高，并且I/R顯著高于I/R+TSA組；I/R組LDH活性明顯高于正常對(duì)照組，I/R+TSA組顯著低于I/R組；West

5、ern blotting檢測(cè)顯示I/R組、 I/R+TSA組HDAC3蛋白表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組，I/R+TSA組顯著低于I/R組；實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)組、I/R+TSA組HDAC3的mRNA表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組，I/R+TSA組顯著低于I/R組。
　　結(jié)論：
　　通過(guò)檢測(cè)心肌細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞外LDH含量證實(shí)了缺血再灌注對(duì)心肌細(xì)胞活力的影響。與正常對(duì)照組比較，I/R組、I/R+TSA組中HDAC3 mRNA以及蛋白表達(dá)