PI3K-Akt-GSK-3β通路在萊菔硫烷調(diào)控心肌冷缺血再灌注損傷中的作用.pdf

1、目的:通過建立大鼠心臟移植模型，探討PI3K/Akt/GSK-3β信號通路在SFN保護心肌冷IRI中的作用。
　　方法:64只SD大鼠（成年健康雄性，體重220-250g）隨機分為4組（每組16只，藥物干預均為受體）：IRI組：移植前24h經(jīng)尾靜脈注射生理鹽水0.3ml；SFN+IRI組：移植前24h經(jīng)尾靜脈注射SFN2.5mg/kg.bw；LY+IRI組：注射生理鹽水前1h及移植前1h分別經(jīng)尾靜注射LY2940020.3mg/K

2、g.bw，余同IRI組；LY+SFN+IRI組：注射SFN前1h及移植前1h分別經(jīng)尾靜注射LY2940020.3mg/Kg.bw，余同SFN+IRI組。按照李占清等人的方法建立心臟移植模型：
　　1.摘取供體大鼠的心臟置于4℃HTK液中保存9h備用。
　　2.將供心用7-0絲線連續(xù)縫合于受體大鼠的腹腔（供心主動脈與受體腹主動脈吻合，供心肺動脈與受體下腔靜脈吻合)，供心復跳，檢查無出血后關(guān)腹。術(shù)后24h摘取供心，一部分供心組織

3、放入10％的福爾馬林中固定，石蠟包埋、切片后行HE染色觀察形態(tài)學變化并用免疫組織化學法檢測Akt、P-Akt、GSK-3β、P-GSK-3β、Bcl-2、Bax的蛋白表達；另一部分放入液氮速凍后轉(zhuǎn)存于-80℃冰箱保存?zhèn)溆茫崛」┬慕M織蛋白并用免疫印跡（Western bolt）法檢測Akt、P-Akt、GSK-3β、P-GSK-3β、Bcl-2、Bax的蛋白表達。
　　結(jié)果:
　　1.組織學：IRI組與LY+IRI組的心肌損

4、傷較嚴重，心肌組織的正常結(jié)構(gòu)破壞，可見小血管擴張、充血，心肌纖維斷裂、排列紊亂，細胞水腫，心肌間質(zhì)大量炎性細胞浸潤；SFN+IRI組心肌損傷較輕：心肌組織結(jié)構(gòu)清楚，小血管擴張、充血較輕，心肌纖維排列整齊、稍有斷裂，細胞形態(tài)基本正常，心肌間質(zhì)有少量炎性細胞浸潤；LY294002+SFN+IRI組的心肌細胞形態(tài)、心肌纖維排列及斷裂、心肌間質(zhì)炎細胞的浸潤情況均介于IRI組和SFN+IRI組之間。
　　2.免疫組織化學法及免疫印跡（wes

5、tern bolt）法檢測：Akt、P-Akt、GSK-3β、P-GSK-3β、Bcl-2、Bax蛋白經(jīng)免疫組織化學法檢測的陽性表達主要位于各組供心心肌細胞的胞漿，呈棕黃色反應。
　　1）Akt蛋白在各組中的表達雖有輕微差異但P＞0.05，無統(tǒng)計學意義；P-Akt蛋白在SFN+IRI組的表達明顯增加，與IRI組比較P＜0.05，有統(tǒng)計學意義；LY294002干預后：LY+SFN+IRI組中P-Akt蛋白表達明顯降低，與LY+IRI

6、組比較P＞0.05，無統(tǒng)計學意義。
　　2）GSK-3β蛋白在各組中的表達雖有輕微差異但P＞0.05，無統(tǒng)計學意義；P-GSK-3β蛋白在SFN+IRI組的表達明顯增加，與IRI組比較P＜0.05，有統(tǒng)計學意義；LY294002干預后：LY+SFN+IRI組中P-GSK-3β蛋白表達明顯降低，與LY+IRI組比較P＞0.05，無統(tǒng)計學意義。
　　3）SFN+IRI組中Bcl-2蛋白表達明顯增加、Bax蛋白表達明顯減少，與IR