敗血癥患者解甘露醇羅爾斯頓菌分離與鑒定及其耐藥基因分析.pdf

1、目的：對(duì)一例病因不明敗血癥患者外周血中病原菌進(jìn)行分離及鑒定，同時(shí)了解分離菌株耐藥性并分析耐藥相關(guān)基因。
　　方法：采集雙份敗血癥患者外周血標(biāo)本分離劃線接種于血平板上，37℃常規(guī)培養(yǎng)24h。挑取單個(gè)菌落用革蘭染色鏡檢以及VITEK2-compact全自動(dòng)細(xì)菌檢測(cè)分析系統(tǒng)進(jìn)行菌種鑒定，然后采用16S rRNA基因PCR及產(chǎn)物測(cè)序進(jìn)一步確定菌種鑒定結(jié)果。采用微量二倍稀釋法對(duì)分離菌株進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)。采用β-內(nèi)酰胺酶、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶確

2、證試驗(yàn)以及AmpC酶和碳青霉烯酶表型試驗(yàn)，了解分離菌株產(chǎn)酶情況及類型。采用PCR分別檢測(cè)腸桿菌科細(xì)菌19種常見β-內(nèi)酰胺酶或超廣譜β-內(nèi)酰胺酶、AmpC酶和碳青霉烯酶基因以及21個(gè)注釋為解甘露醇羅爾斯頓菌β-內(nèi)酰胺酶基因(GenBank Accession No.:CP010799，CP010800，AJ270257)，擴(kuò)增產(chǎn)物T-A克隆后測(cè)序。
　　結(jié)果：上述血標(biāo)本中分離出同一革蘭陰性短桿菌，VITEK2-compact全自動(dòng)細(xì)

3、菌檢測(cè)分析系統(tǒng)及其GN細(xì)菌鑒定卡鑒定為解甘露醇羅爾斯頓菌，鑒定值=99％，鑒定編碼4003611303500001。 PCR及其產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果顯示，該解甘露醇羅爾斯頓菌分離菌株16S rRNA基因擴(kuò)增片段核苷酸序列與GenBank中公布的相應(yīng)基因序列(Accession No.:AJ270257)相似性為100％。解甘露醇羅爾斯頓菌分離株對(duì)頭孢曲松、頭孢吡肟、環(huán)丙沙星、左旋氧氟沙星、替加環(huán)素、復(fù)方新諾明敏感，但對(duì)頭孢他啶、阿莫西林/克拉維

4、酸、氨芐西林、替卡西林/克拉維酸、哌拉西林/他唑巴坦、亞胺培南、美羅培南、氨曲南、慶大霉素、阿米卡星、呋喃妥因耐藥。所有19種腸桿菌科細(xì)菌常見耐藥相關(guān)酶類基因PCR擴(kuò)增結(jié)果均為陰性，但可擴(kuò)增出TK49_09850、TK49_12955、TK49_14470、TK49_14495、TK49_18990五個(gè)解甘露醇羅爾斯頓菌β-內(nèi)酰胺酶基因條帶。與GenBank中相應(yīng)解甘露醇羅爾斯頓菌β-內(nèi)酰胺酶基因序列(Accession No.:CP0

5、10799，CP010800，AJ270257)比較，解甘露醇羅爾斯頓菌分離株TK49_09850、TK49_12955、TK49_14470、TK4914495、TK49_18990β-內(nèi)酰胺酶基因核苷酸和氨基酸序列相似性分別高達(dá)96.2％(737/766)和96.2％(251/261)、97.3％(838/861)和99.0％(283/286)、100％(795/795)和100％(264/264)、97.5％(980/1005)和