ClC-3氯通道蛋白在腎上腺素能受體激動(dòng)所致心肌肥厚中的作用研究.pdf

1、目的：獲得 ClC-3氯通道蛋白參與體內(nèi)外腎上腺素能受體激動(dòng)所致心肌肥厚的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
　　方法：
　　(1)腎上腺素能受體激動(dòng)劑腹腔注射構(gòu)建心肌肥厚的小鼠模型。
　　(2)小動(dòng)物超聲心動(dòng)圖檢測(cè)小鼠室間隔，心室前壁厚度，獲得小鼠心臟指數(shù)(HW/BW)，結(jié)合心臟組織HE染色分析確定小鼠心肌肥厚的程度。
　　(3)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)小鼠心肌ClC-3蛋白的表達(dá)變化。
　　(4)胰蛋白酶消化法原代培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞，

2、視頻監(jiān)視其搏動(dòng)情況。
　　(5)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞和小鼠心臟心肌肥厚標(biāo)志基因心房利鈉因子（ANF）及ClC-3 mRNA的變化。
　　(6)蛋白免疫印跡技術(shù)（western blot）檢測(cè)細(xì)胞和小鼠心臟ClC-3蛋白表達(dá)的變化。
　　(7) Countstar自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)分析儀檢測(cè)分析細(xì)胞體積的變化。
　　結(jié)果：
　　(1)成功構(gòu)建腎上腺素能受體激動(dòng)劑誘導(dǎo)的心肌肥厚模型。超聲心動(dòng)圖顯示單獨(dú)給予β腎上

3、腺素能受體激動(dòng)劑異丙腎上腺素（ISO）或α腎上腺素能受體激動(dòng)劑去甲腎上腺素（NE）處理的小鼠室間隔增厚，心室前壁厚度增加；小鼠心臟指數(shù)(HW/BW)亦明顯升高；HE染色結(jié)果顯示：ISO、NE處理組較對(duì)照組心肌結(jié)構(gòu)松散、膠原纖維含量增多、心肌纖維明顯增粗，肌原纖維橫截面積明顯增大、細(xì)胞核聚集且增大。
　　(2)與對(duì)照組相比，ISO和 NE實(shí)驗(yàn)組小鼠心肌肥厚標(biāo)志基因ANF表達(dá)量增加，而ClC-3的mRNA表達(dá)量減少，免疫組化和蛋白免疫

4、印記結(jié)果同樣顯示ClC-3氯通道蛋白的表達(dá)量降低。
　　(3)β腎上腺素能受體拮抗劑普萘洛爾（Pro）能減輕ISO誘導(dǎo)的心肌肥厚，與對(duì)照相比，心臟指數(shù)HW/BW顯著下降，α腎上腺素能受體拮抗劑酚妥拉明（Phe）處理組與NE處理組相比，心臟指數(shù)HW/BW亦有降低的趨勢(shì)。
　　(4)普萘洛爾和酚妥拉明分別處理組小鼠心肌肥厚因子與模型組比較，心肌肥厚標(biāo)志基因心房利鈉因子(Atrial natriuretic factor,ANF)