IFITM3在原發(fā)性肝癌中的表達及其對MMP9調控效應研究.pdf

1、目的:
　　1、研究干擾素誘導跨膜蛋白3（IFITM3）在原發(fā)性肝癌中的異常表達并分析其與臨床病理特征的關系。
　　2、探討 IFITM3通過調節(jié)基質金屬蛋白酶9(MMP9)對肝癌細胞侵襲和遷移能力的影響。
　　方法:
　　1、通過免疫組織化學染色法和 Western blot檢測60例肝癌組織及對應癌旁組織中 IFITM3和 MMP9的表達水平并分析相關性，同時運用統(tǒng)計學分析 IFITM3的表達與臨床病理特征的

2、關系。
　　2、構建 IFITM3小干擾 RNA片段（psilencer3.1-shIFITM3），采用脂質體介導轉染肝癌細胞（ HepG2細胞系），通過 Western blot法檢測轉染后肝癌細胞中 IFITM3蛋白表達變化，篩選最佳干擾序列。
　　3、將實驗分為空白對照組（Control cells group）、無義序列組（Scrambled siRNA group）、IFITM3 siRNA group，用實時熒光

3、定量 PCR檢測轉染后 IFITM3和MMP9 mRNA的表達；Western Blot檢測此兩種分子在蛋白水平的表達；CCK8(cell counting kit8)檢測轉染后細胞增殖能力；采用Transwell試驗和劃痕試驗分別觀察轉染后的 HepG2細胞侵襲和遷移能力的變化。
　　結果:
　　1、與癌旁組織比較，IFITM3和MMP9在肝癌組織中蛋白的陽性表達率和表達量的明顯升高（81.67％ vs.13.33%；88

4、.33% vs.8.33%，均P<0.05）。且IFITM3與MMP9蛋白在肝癌組織中的表達呈正相關性（r=0.476， P＜0.01）。
　　2、IFITM3在肝癌組織的表達水平與腫瘤大小、腫瘤包膜侵襲、微血管侵襲、肝內轉移、TNM分期以及和病理分化等級低呈顯著正相關（P<0.05），而與年齡、性別、肝硬化及 AFP等其他臨床病理特征均無明顯相關性（P＞0.05）。
　　3、與其他干擾序列比較， hs-IFITM3-si-

5、2序列干擾 IFITM3表達效果最佳（P＜0.05）。
　　4、與無義序列組和空白對照組比較，psilencer3.1-shIFITM3轉染后，HepG2細胞IFITM3和MMP9在 mRNA及蛋白水平表達降低，細胞增值率和穿膜細胞數明顯減少，劃痕實驗轉染組細胞融合率明顯降低，以上定量指標間的差異均有統(tǒng)計學意義（均P<0.05）。
　　結論:
　　1、在原發(fā)性肝癌中 IFITM3高表達，且與腫瘤大小、腫瘤包膜侵襲、微血