siRNA下調(diào)FMNL-2基因?qū)υl(fā)性肝癌中MMP-2基因的表達(dá)影響.pdf

1、目的:
　　1、檢測基因FMNL-2、MMP-2在原發(fā)性肝癌組織中的表達(dá)情況,探討二者與肝癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系;
　　2、初步探索FMNL-2與MMP-2在調(diào)控肝癌細(xì)胞發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移中可能的作用機(jī)制。
　　方法:
　　1、采用免疫組織化學(xué)染色MaxvisionTM法分別檢測100例原發(fā)性肝癌及對應(yīng)癌旁肝組織中FMNL-2、MMP-2的蛋白表達(dá),應(yīng)用圖文分析軟件Image-Pro Plus6.0測定FMNL-

2、2和MMP-2的蛋白累積光密度值(IOD)并統(tǒng)計分析結(jié)果;
　　2、采用RT-PCR技術(shù)檢測FMNL-2及MMP-2在三株不同轉(zhuǎn)移潛能的人肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況,篩選出高表達(dá)FMNL-2及MMP-2的肝癌細(xì)胞株;
　　3、采用siRNA瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建FMNL-2低表達(dá)的肝癌細(xì)胞株;
　　4、采用RT-PCR技術(shù)檢測FMNL-2下調(diào)后的肝癌細(xì)胞株中MMP-2的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1、免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3、:肝癌及癌旁肝組織中FMNL-2蛋白IOD值分別為90748.36±46276.91和39075.46±24763.12,MMP-2蛋白IOD值分別為87969.46±27131.77和59517.72±20218.23,兩組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);FMNL-2在伴肝硬化組中IOD值為47471.96±40273.54,明顯低于不伴肝硬化組(P<0.05);MMP-2在HBsAg陽性組中IOD值為77668.34±27682

4、.79,稍低于HBsAg陰性組(P<0.05),在有轉(zhuǎn)移組中IOD值為63854.73±21730.42,稍低于無轉(zhuǎn)移組(P<0.05);肝癌組織中FMNL-2和MMP-2蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.240,P=0.016)。
　　2、RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果:FMNL-2在MHCC-97H、HepG2及QGY-7703細(xì)胞株內(nèi)的mRNA相對表達(dá)水平分別為(1.19±0.12)、(0.95±0.26)和(0.54±0.09),MMP-2

5、在三株細(xì)胞株內(nèi)的mRNA相對表達(dá)水平分別為(0.78±0.20)、(0.34±0.05)和(0.21±0.03);MHCC-97H肝癌細(xì)胞中FMNL-2、MMP-2的mRNA表達(dá)明顯強(qiáng)于HepG2、QGY-7703中的表達(dá);siRNA下調(diào)MHCC-97H細(xì)胞中的FMNL-2表達(dá)后,正常對照組、陰性對照組和干擾組的FMNL-2 mRNA相對表達(dá)水平均值分別為(0.86±0.03)、(0.90±0.10)和(0.24±0.02),正常對照組

6、、陰性對照組和干擾組的MMP-2 mRNA相對表達(dá)水平均值分別為(1.44±0.04)、(1.17±0.05)和(0.31±0.01);干擾組的MMP-2 mRNA表達(dá)水平顯著低于正常對照組和陰性對照組(p<0.05);正常對照組與陰性對照組MMP-2 mRNA表達(dá)水平無明顯差異(p>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、與癌旁正常肝組織相比,肝癌組織中FMNL-2及MMP-2存在高表達(dá),二者之間的表達(dá)呈正性相關(guān)。
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