氫離子相關(guān)通道在原發(fā)性肝癌細(xì)胞中的表達(dá)及其作用.pdf

1、目的：研究氫離子相關(guān)通道（NHE，V-ATPase，H+-K+-ATPase）在人原發(fā)性肝癌細(xì)胞中的表達(dá)，以及在控制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、分化及轉(zhuǎn)移中的作用，從而為原發(fā)性肝癌的治療提供新的藥物靶點(diǎn)。
　　 方法：選擇正常人肝臟和原發(fā)性肝癌手術(shù)切除病人，分為正常肝臟組和肝癌組。運(yùn)用Real-Time RT-PCR技術(shù)，Western-Blot技術(shù)分別檢測(cè)其中氫離子相關(guān)通道的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)。選取健康雄性BABL/cnu/nu，裸鼠年齡

2、5-6w，體重20-25g，由第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，SPF級(jí)條件下飼養(yǎng)，成功建立裸鼠人肝癌細(xì)胞株皮下-肝內(nèi)移植模型后，隨機(jī)分成建模組，泮托拉唑20mg組（PPZ20mg），泮托拉唑40mg組（PPZ40mg），泮托拉唑80mg組（PPZ80mg），BafilomycinA1組（BM），二甲基亞砜組（DMSO）。每天腹腔內(nèi)注射相應(yīng)藥物，按1w，2w，3w，4w不同時(shí)間點(diǎn)，分批對(duì)應(yīng)處死裸鼠，開(kāi)腹觀察體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)，變化的情況，并在HE

3、染色下進(jìn)一步觀察病理變化情況。
　　 結(jié)果：①.正常肝臟與肝癌內(nèi)氫離子相關(guān)通道m(xù)RNA表達(dá)情況：正常肝臟組與肝癌組比較，V-ATPase c，V-ATPase a，V-ATPase C，NHE1四個(gè)通道的mRNA表達(dá)肝癌組高于正常肝臟組。②.正常肝臟與肝癌內(nèi)氫離子相關(guān)通道蛋白質(zhì)表達(dá)情況：正常肝臟組與肝癌組比較，V-ATPase c在肝癌組中的表達(dá)明顯高于正常肝臟組（P<0.01）；V-ATPase a，V-ATPase C，V-

4、ATPase B，NHE1，NHE3在正常肝臟組與肝癌組中的表達(dá)相似（P>0.05）；H+-K+ATPaso alpha，H+-K+ATPase beta在正常肝臟組與肝癌組中均無(wú)表達(dá)。③.氫離子相關(guān)通道抑制劑對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響：建立裸鼠人肝癌皮下.肝內(nèi)移植模型成功率約100％。泮托拉唑三個(gè)劑量組（20mg，40mg，80mg）與建模組相比分別在1周，2周，3周，4周均能有效的抑制腫瘤生長(zhǎng)，腫瘤體積指數(shù)下降，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<

5、0.05），并在三個(gè)劑量組間存在遞減關(guān)系。而B(niǎo)afilomycin A1組與DMSO組相比分別在1周，2周，3周，4周作用相似（p>0.05）與建模組相比，均有使腫瘤減小的趨勢(shì)。另外，組織學(xué)觀察表明，泮托拉唑組實(shí)體瘤內(nèi)見(jiàn)大量的壞死組織。
　　 結(jié)論：（1）氫離子相關(guān)通道中V-ATPase c，V-TAPase a，V-ATPase C，NHEl的mRNA在肝癌中表達(dá)明顯增高，但只有V-ATPase c的蛋白質(zhì)表達(dá)在肝癌中明顯增高