天然富硒和人工富硒綠茶中硒多糖活性和結(jié)構(gòu)的研究.pdf

1、本論文以天然富硒和人工富硒綠茶為原料，首先對(duì)其基本成分和硒含量進(jìn)行測(cè)定，然后分別對(duì)其進(jìn)行茶多糖的提取、分離和純化，最后再對(duì)其抗腫瘤活性和結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究。本論文主要研究?jī)?nèi)容如下:
　　(1)首先對(duì)兩種茶葉的基本成分和硒含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示:天然富硒綠茶的茶多酚含量高于人工富硒綠茶，其它成分和硒含量均低于人工富硒綠茶;然后再對(duì)兩種富硒多糖的提取得率和成分含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示:人工富硒粗多糖的得率、總可溶性糖、可溶性蛋白、硒含量均高于

2、天然富硒粗多糖，分別為4.29％、24.78％、1.27％、18.42mg/kg，而天然富硒粗多糖的糖醛酸含量為40.96％，明顯高于人工富硒租多糖;最后再將兩種富硒粗多糖經(jīng)過(guò)DEAE Sepharose FF分離后分別得到四種不同的組分，首先對(duì)其均一性和分子量進(jìn)行測(cè)定后發(fā)現(xiàn)，兩種富硒粗多糖均出現(xiàn)四個(gè)峰，最大分子量均過(guò)百萬(wàn)Da，可推測(cè)其可能為糖蛋白，精品多糖ASe.-TPS2和NSe-TPS2均出現(xiàn)單一對(duì)稱峰，說(shuō)明其為不含雜質(zhì)的純多糖，

3、可用于后續(xù)結(jié)構(gòu)的檢測(cè)。然后對(duì)其得率和成分進(jìn)行分析，結(jié)果顯示:天然純化多糖中NSe-TPS2得率最高，NSe-NTPS得率最低，而人工純化多糖與其相反。糖醛酸測(cè)定結(jié)果表明，天然富硒粗多糖純化后的四個(gè)組分均為酸性糖，而人工富硒粗多糖純化后的四個(gè)組分中，除了ASe-TPS3其余均為酸性糖，多糖中還檢測(cè)到少量蛋白質(zhì)，說(shuō)明經(jīng)過(guò)一系列純化步驟后，多糖仍結(jié)合有少量蛋白質(zhì)。
　　(2)利用上一步提取和純化出的兩種富硒茶多糖的粗品和精品為原料，分別

4、進(jìn)行體內(nèi)外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示:茶多糖與硒均具有一定的抗腫瘤效果。其中無(wú)機(jī)硒抗腫瘤效果大于有機(jī)硒;普通茶多糖抗腫瘤效果大于它與酵母硒的混合組;天然富硒茶多糖的抗腫瘤效果＞人工富硒茶多糖＞普通茶多糖和酵母硒混合組，并且均呈現(xiàn)劑量依賴性的特點(diǎn)，這一結(jié)果也能說(shuō)明結(jié)合態(tài)的硒多糖比硒與多糖簡(jiǎn)單的混合具有更強(qiáng)的抗腫瘤效果，硒能夠增強(qiáng)茶多糖的抗腫瘤活性。
　　(3)最后再對(duì)兩種富硒多糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察和分析。單糖組成的測(cè)定結(jié)果顯示:天然富硒粗多糖

5、NSe-TPS和精品多糖均為含有較高量糖醛酸的酸性糖，人工富硒粗多糖ASe-TPS和精品多糖也為含有較高量糖醛酸的酸性糖;紫外掃描結(jié)果顯示:兩種富硒粗多糖均有明顯的蛋白吸收峰，其中天然精品多糖NSe-TPS3和人工精品多糖ASe-TPS1同樣出現(xiàn)較明顯的蛋白吸收峰，說(shuō)明這幾個(gè)組分均為糖蛋白，其它組分有較弱的蛋白吸收峰，說(shuō)明粗多糖經(jīng)純化后仍含有少量蛋白質(zhì);紅外掃描結(jié)果顯示:兩種富硒多糖具有相似的紅外圖譜，不同的是天然富硒茶多糖四個(gè)譜中均出

6、現(xiàn)糖醛酸特征吸收峰，而人工富硒茶多糖只在粗多糖和精品多糖ASe-TPS1中才出現(xiàn)此峰，說(shuō)明天然富硒多糖均為酸性糖;
　　(4)部分酸水解的結(jié)果顯示:巖藻糖只存在于兩種富硒茶多糖的支鏈上，阿拉伯糖、半乳糖和甘露糖主要處于兩種富硒茶多糖的支鏈上，葡萄糖和半乳糖醛酸主要處于兩種富硒茶多糖的主鏈上，人工富硒茶多糖不含有果糖，當(dāng)酸濃度為0.05M時(shí)，兩種富硒茶多糖的支鏈已基本水解完全。
　　(5)高碘酸氧化和Smith降解結(jié)果顯示:由

7、高碘酸氧化結(jié)果可推測(cè)ASe-TPS2結(jié)構(gòu)中可能存在1→、1→2、1→3、1→4、1→6、1→2，6、1→4，6連接的糖苷鍵，NSe-TPS2結(jié)構(gòu)中可能存在1→、1→2、1→4、1→6、1→2，6、1→4，6連接的糖苷鍵（本實(shí)驗(yàn)室之前所測(cè)）。由Smith降解產(chǎn)物的GC可推測(cè)出ASe-TPS2結(jié)構(gòu)中可能存在1→、1→2、1→3、1→5、1→6、1→2，6連接的糖苷鍵，其中1→3連接的可能占主要部分，NSe-TPS2結(jié)構(gòu)中可能存在1→、1→2

8、、1→4、1→5、1→6連接的糖苷鍵（本實(shí)驗(yàn)室之前所測(cè)）。
　　(6)核磁共振結(jié)果顯示:兩種富硒多糖均含有α、β兩種構(gòu)型的葡萄糖，但主要為β-D-Glup;酸性糖均為α-D-GalpA，且NSe-TPS2的酸性糖含量明顯大于ASe-TPS2;均含有α、β兩種構(gòu)型的鼠李糖;均含有阿拉伯糖，但在ASe-TPS2中為α-L-Araf,在NSe-TPS2中為β-L-Araf;均含有甲酯基、乙?；蜕倭康牡鞍踪|(zhì)，故它們的化學(xué)本質(zhì)均為酸性糖蛋

9、白，這一結(jié)果與紅外結(jié)果保持一致。
　　(7)甲基化最終分析結(jié)果可知:人工富硒多糖的結(jié)構(gòu)主要是以β-D-(1→3)-Glup和α-D-(1→4)-GalpA為骨架，分支主要是由α-L-(1→2，3)-Araf、β-D-(1→4)-Glup、α-L-(1→2)-Rhap和少量α-D-(1→4)-GalpA組成，非還原性末端主要由Araf和Xylp組成;天然富硒茶多糖結(jié)構(gòu)主要是以β-D-(1→4)-Glup和α-D-(1→4)-Galp

10、A為骨架，分支主要由β-L-(1→2)-Araf、α-D-(1→3)-Galp和β-L-(1→2)-Rhap組成，非還原性末端主要由Glup和Galp組成。
　　(8)掃描電鏡結(jié)果顯示:兩種富硒綠茶的粗多糖與精品多糖相比，空間構(gòu)象由分散的片狀或葉狀變成了更加零散的絲狀、條狀和顆粒狀等不規(guī)則的狀態(tài);熱重分析結(jié)果顯示:天然富硒茶多糖比人工富硒茶多糖的空間結(jié)構(gòu)更穩(wěn)定。
　　由以上結(jié)果可知兩種多糖結(jié)構(gòu)上的區(qū)別在于構(gòu)成人工多糖糖鏈骨架

11、的葡萄糖為β-D-(1→3)-Glup，而構(gòu)成天然多糖糖鏈骨架的葡萄糖為β-D-(1→4)-Glup;GalpA在人工多糖的主鏈和支鏈中均有存在，但在天然多糖中只存在于主鏈;構(gòu)成糖鏈分支的阿拉伯糖在人工多糖中為α構(gòu)型，而在天然多糖中為β構(gòu)型;非還原性末端人工多糖為Araf和Xylp，天然多糖為Glup和Galp，天然多糖空間結(jié)構(gòu)更穩(wěn)定。兩者的共同點(diǎn)在于多糖主鏈均由β型葡萄糖和α型半乳糖醛酸構(gòu)成，支鏈中均含有阿拉伯糖和鼠李糖，粗多糖空間構(gòu)