產(chǎn)KPC型碳青霉烯酶大腸埃希菌分子流行病學(xué)及耐藥傳播機制研究.pdf

1、碳青霉烯類抗生素是臨床治療多重耐藥革蘭陰性菌感染的重要藥物，碳青霉烯耐藥腸桿菌科細菌的流行給臨床感染性疾病的治療帶來了很大難題，而耐藥的主要原因即是細菌產(chǎn)碳青霉烯酶，其中在我國以KPC型碳青霉烯酶最為常見。
　　本研究收集2012年7月至2014年1月杭州市中醫(yī)院和浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院臨床共25株產(chǎn)KPC酶大腸埃希菌。利用K-B紙片法測試所有菌株對22種常用抗菌藥物的敏感性;改良Hodge實驗確認菌株產(chǎn)碳青霉烯酶，PCR擴增

2、確認blaKPC基因;脈沖場凝膠電泳(PFGE)及多位點序列分型(MLST)技術(shù)進行菌株同源性分析。利用濾膜接合實驗將臨床菌株攜帶質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移至受體菌;堿裂解法提取質(zhì)粒;細菌包埋S1核酸酶酶切再PFGE的方法判斷質(zhì)粒分子量大小;挑選代表菌株進行高通量測序及序列分析，注釋攜帶有blaKPC基因的片段，并設(shè)計引物PCR擴增其余菌株，分析blaKPC基因的周圍結(jié)構(gòu);PCR擴增篩查其它常見的耐藥基因。
　　25株臨床收集大腸埃希菌經(jīng)確認均

3、為產(chǎn)KPC酶菌株，編碼有blaKPC-2基因，這些產(chǎn)KPC酶菌株對大多常用抗菌藥物的耐藥率很高，均表現(xiàn)為多重耐藥菌。流行病學(xué)分析顯示，產(chǎn)KPC酶菌株來源病人以中老年為主，送檢的臨床科室分布有一定的集中性，多集中在急診科、ICU和老年病科。PFGE分型可以將25株菌株分為克隆A（4株）、克隆B（5株）和克隆C（2株），其余14株為散發(fā)克隆。MLST分型則分為8個ST型，其中以ST131型為主，共有14株，另外還包括ST167型3株，ST2

4、003型3株，其余ST型各有1株，這些ST型之間同源性相距較遠。臨床分離大腸埃希菌往往攜帶多個質(zhì)粒，質(zhì)粒分子量大小在25kb～200kb之間，而且大多具有可接合性。blaKPC-2基因由質(zhì)粒編碼，高通量測序所獲得的序列片段分析表明blaKPC-2基因位于一個Tn3-Tn4401復(fù)合轉(zhuǎn)座子中，并且大部分菌株都擁有一致的周圍結(jié)構(gòu)。這些菌株還常共同編碼blaCTX-M、 blaTEM、 blaSHV、 qnr、aac(6')-Ib及rmtB等