產(chǎn)NDM-1泛耐藥大腸埃希菌耐藥機(jī)制及流行特性研究.pdf

1、目的：
　　分析2010-2014年間溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床分離的大腸埃希菌耐藥變化趨勢(shì)，研究臨床分離產(chǎn)新德里金屬β內(nèi)酰胺酶-1(New Delhi metallo-beta-lactamase-1，NDM-1)泛耐藥大腸埃希菌的耐藥機(jī)制及其流行特性，為臨床抗感染治療、院內(nèi)感染管理與控制提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.回顧性研究2010-2014年間溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床分離大腸埃希菌的感染分布以及耐藥

2、情況。
　　2.PCR擴(kuò)增并測(cè)序檢測(cè)菌株中blaNDM-1基因，確定產(chǎn)NDM-1菌株。
　　3.改良Hodge試驗(yàn)和EDTA增效實(shí)驗(yàn)檢測(cè)產(chǎn)NDM-1菌株的耐藥表型;瓊脂稀釋法測(cè)定產(chǎn)NDM-1菌株對(duì)頭孢菌素類、β-內(nèi)酰胺類、碳青霉烯類、氨基糖苷類以及氟喹諾酮類等抗菌藥物的最低抑菌濃度。
　　4.通過(guò)PCR擴(kuò)增并測(cè)序?qū)ι鲜霎a(chǎn)NDM-1的菌株進(jìn)行超廣譜β-內(nèi)酰胺(ESBLs)酶、碳青霉烯酶、16S rRNA甲基化酶和質(zhì)粒及染

3、色體介導(dǎo)的喹諾酮類耐藥基因的檢測(cè)。
　　5.通過(guò)Southcrn雜交對(duì)6株XDR(extensively drug resistant)大腸埃希菌blaNDM-1基因進(jìn)行定位，并通過(guò)接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)和PCR擴(kuò)增分析其所在質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移性和復(fù)制子類型。
　　6.脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)分析攜帶有blaNDM-1大腸埃希菌菌株的流行特性;并通過(guò)多位點(diǎn)序列分型(MLST)分析對(duì)攜帶blaNDM-1大腸埃希菌菌株進(jìn)行分型研究，同時(shí)與美國(guó)疾

4、病控制和預(yù)防中心(CDC)網(wǎng)站(http://www.cdc.gov/pulsenet/protocols.htm)上的結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，了解本研究中產(chǎn)blaNDM-1大腸埃希菌菌株與全球流行株的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1.2010-2014年溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床分離873株大腸埃希菌，分布前三位的病區(qū)分別是泌尿外科(12.4％)、神經(jīng)外科(11.6％)及ICU(11.3％)，大腸埃希菌對(duì)第三代頭孢菌素類藥物、β-內(nèi)酰

5、胺類/β-內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)合物藥物、氟喹諾酮類藥物均呈現(xiàn)較高的耐藥性;并從2014年5-8月的臨床標(biāo)本中篩選出6株產(chǎn)NDM-1泛耐藥大腸埃希菌(菌株編號(hào)為DC2303，DC2504，DC2516，DC2543，DC254，DC917)，改良Hodge試驗(yàn)和EDTA增效實(shí)驗(yàn)檢測(cè)均為陽(yáng)性。
　　2.6株產(chǎn)NDM-1大腸埃希菌對(duì)三、四代頭孢菌素，氟喹諾酮類藥物，碳青霉烯類藥物，氨基糖苷類藥物，p-內(nèi)酰胺類/β-內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)合物等抗菌

6、藥物均耐藥。
　　3.PCR檢測(cè)結(jié)果顯示6株產(chǎn)NDM-1大腸埃希菌均攜帶blaNDM-1，blaSHV-1，aac(6')-ib-cr， qnrB， rmtb，其中有些菌株還攜帶qnrA，blaCTX-M-1，blaCTX-M-9等耐藥基因。
　　4.Southern blot定位分析顯示blaNDM-1位于約54.2kb大小的質(zhì)粒上，接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)成功獲得NDM-1陽(yáng)性接合子。
　　5.質(zhì)粒分型發(fā)現(xiàn)DC2303和DC9

7、17的質(zhì)粒復(fù)制子類型分別為IncF I和IncY-F I，其余4株菌均為IncN。
　　6.SDS-PAGE和結(jié)構(gòu)基因序列分析顯示所有菌株均表現(xiàn)為OmpC缺失。
　　7.脈沖場(chǎng)電泳分析發(fā)現(xiàn)6株產(chǎn)NDM-1大腸埃希菌均為同一克隆型，同時(shí)多序列位點(diǎn)分型分析發(fā)現(xiàn)除1株菌(DC2303)屬于ST594(等位基因:31-195-11-36-27-67-26-125)型外，其他5株菌屬于ST2(等位基因:8-2-7-3-7-1-4-2)

8、型。
　　結(jié)論：
　　1.本研究中2010-2014年間溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床分離的大腸埃希菌標(biāo)本來(lái)源主要來(lái)自于尿液，主要分離的科室為泌尿外科，對(duì)臨床常用的多種抗菌藥物耐藥情況嚴(yán)重，僅對(duì)碳青霉烯類抗菌藥物敏感性較好。
　　2.本研究中產(chǎn)NDM-1泛耐藥大腸埃希菌株對(duì)多種抗菌藥物高度耐藥的主要原因是其攜帶有多種耐藥基因以及外膜蛋白的缺失。
　　3.blaNDM-1基因位于可接合轉(zhuǎn)移質(zhì)粒上，增加了耐藥性播散的風(fēng)