碳青霉烯類耐藥肺炎克雷伯菌分子流行病學(xué)的研究.pdf

1、目的：
　　 本研究擬通過對(duì)北京A醫(yī)院和浙江地區(qū)等6家醫(yī)院收集的共175株碳青霉烯類耐藥肺炎克雷伯菌的系統(tǒng)研究，獲得碳青霉烯類耐藥肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶產(chǎn)生情況、碳青霉烯酶的特性、表達(dá)酶的基因型和分子流行病學(xué)信息。為由此類細(xì)菌引起的臨床感染的治療提供最佳抗菌藥物選擇，更為制定防控此類細(xì)菌傳播提供系統(tǒng)完整的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和參考依據(jù)。
　　 方法：
　　 收集2011年1月至2012年6月臨床分離的碳青霉烯類耐藥肺炎克雷伯

2、菌175株，采用MIC法檢測菌株對(duì)藥物的敏感性，紙片法表型確證試驗(yàn)檢測超廣譜β內(nèi)酰胺酶(ESBL)，改良Hodge試驗(yàn)檢測碳青霉烯酶表型。PCR、DNA測序以及Blast比對(duì)等方法確定菌株碳青霉烯酶、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶和質(zhì)粒介導(dǎo)的AmpC酶基因型。重復(fù)序列聚合酶鏈反應(yīng)(REP-PCR)、脈沖場凝膠電泳(PFGE)技術(shù)和多位點(diǎn)序列分型(MLST)分析菌株同源性，并對(duì)3種分型方法進(jìn)行比較。
　　 結(jié)果：
　　 1.藥物敏感性

3、試驗(yàn)結(jié)果175株肺炎克雷伯菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類、呋喃妥因、復(fù)方磺胺甲噁唑和環(huán)丙沙星等藥物耐藥率較高，其耐藥率在72％以上。有168株對(duì)厄他培南耐藥，耐藥率高達(dá)96.0％(168/175)，7株對(duì)厄他培南敏感菌株但表現(xiàn)對(duì)亞胺培南或美羅培南耐藥，因此，受試的175株肺炎克雷伯菌對(duì)碳青霉烯類均為表型耐藥。對(duì)米諾環(huán)素、四環(huán)素、阿米卡星和妥布霉素耐藥率在11.4％～57.7％。未檢到對(duì)替加環(huán)素耐藥株，但檢出中介菌株15株。
　　 2.改良Ho

4、dge試驗(yàn)與ESBLs表型試驗(yàn)結(jié)果175株肺炎克雷伯菌中改良Hodge試驗(yàn)陽性140株，陽性率80.0％(140/175)，ESBLs表型試驗(yàn)陽性50株，占28.6％(50/175)。
　　 3.耐藥酶基因檢測及序列測定結(jié)果102株攜帶blaKPC-2基因，占58.3％(102/175)，6株攜帶blaIMP4基因，占3.4％(6/175)。11.4％(20/175)攜帶blaDHA-1基因。有89.1％(156/175)株攜帶

5、blaSHV基因，63.4％(111/175)菌株攜帶blaTEM基因，50.3％(88/175)菌株攜帶blaCTX-M基因。66.9％(117/175)菌株同時(shí)具有3種以上耐藥基因。
　　 4.同源性分析結(jié)果使用REP-PCR對(duì)175株菌株進(jìn)行指紋圖譜分析，擴(kuò)增條帶數(shù)3～8條，產(chǎn)物最長1600bp，最短200bp，分為12個(gè)譜型，其中以G型為主，共有71株，占40.6％，其次為F型有35株，占20.0％。北京地區(qū)以G型為主，

6、占55.6％(70/127);杭州地區(qū)以F型為主，占55.6％(25/45)。
　　 5.3種分型方法比較結(jié)果隨機(jī)抽取38株試驗(yàn)菌株，并比較3種分型方法的檢測結(jié)果。REP-PCR將38株菌分為8個(gè)譜型，其中以G型為主，有14株，占36.8％(14/38)，其次為F型有13株，占34.2％(13/38)。MLST將38株菌分為6個(gè)序列型，其中以ST87型為主，共有27株，占71.1％(27/38)，其次為ST88型有6株，占15.

7、8％(6/38)。PFGE將38株菌分為6個(gè)譜型，12個(gè)亞型。其中以A型為主，共有18株，占47.4％(18/38)，其次為C型有10株，占26.3％(10/38)。
　　 結(jié)論：
　　 1.碳青霉烯類抗生素耐藥肺炎克雷伯菌在體外藥敏試驗(yàn)中，對(duì)多種抗生素耐藥率較高，對(duì)替加環(huán)素顯示了較高的敏感率，臨床可考慮使用替加環(huán)素治療此類細(xì)菌引起的感染。
　　 2.碳青霉烯類耐藥肺炎克雷伯菌以blaKPC-2基因型為主，其次為

8、blaIMP-4基因型;ESBLs以blaCTX-M-14基因型為主。
　　 3.REP-PCR結(jié)果顯示某些醫(yī)院存在克隆株流行，北京A醫(yī)院與杭州地區(qū)流行株不同，北京A醫(yī)院以G型為主，杭州地區(qū)以F型為主。
　　 4.3種分型方法分辨率不同，REP-PCR與多位點(diǎn)序列分析分辨率相同，弱于脈沖場凝膠電泳。REP-PCR、PFGE與MLST的結(jié)果具有較好的一致性，但是在對(duì)ST87菌株的區(qū)分上，REP-PCR、PFGE和MLST存