耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌的耐藥機(jī)制及分子流行病學(xué)研究.pdf

1、目的：了解上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐藥機(jī)制、流行趨勢(shì)及臨床特點(diǎn)。為 CRKP院內(nèi)感染預(yù)防控制提供理論依據(jù)，并指導(dǎo)臨床合理使用抗生素。
　　方法：1.收集2009年-2013年我院臨床標(biāo)本中分離到的CRKP，采用Vitek-2 Compact全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)聯(lián)合紙片擴(kuò)散法（K-B法）進(jìn)行藥敏試驗(yàn)；2.用改良Hodge試驗(yàn)及亞胺培南/亞胺培南-EDTA金屬酶抑制試驗(yàn)（IP/IPI E-t

2、est）進(jìn)行碳青霉烯酶及金屬酶表型篩查；3. PCR方法及基因測(cè)序檢測(cè)碳青霉烯酶、AmpC酶及ESBLs酶基因；4.采用SDS-PAGE檢測(cè)外膜蛋白的表達(dá)情況；5.對(duì)產(chǎn)碳青霉烯酶菌株進(jìn)行質(zhì)粒轉(zhuǎn)移接合試驗(yàn)；6.對(duì)外科重癥監(jiān)護(hù)室（SICU）進(jìn)行環(huán)境標(biāo)本采樣并篩選 CRKP；7.采用多位點(diǎn)序列分型（MLST）及脈沖場(chǎng)凝膠電泳（PFGE）方法對(duì)臨床標(biāo)本及環(huán)境樣本分離到的CRKP進(jìn)行基因分型，并結(jié)合患者的臨床資料探討我院CRKP的分子流行病學(xué)特點(diǎn)

3、。
　　結(jié)果：1.2009年-2013年期間共收集了84株分離自臨床標(biāo)本的CRKP。2.72株改良Hodge試驗(yàn)陽(yáng)性，1株IP/IPI E-test試驗(yàn)陽(yáng)性。3. PCR及測(cè)序結(jié)果顯示72株改良Hodge試驗(yàn)陽(yáng)性的菌株中有69株攜帶KPC-2基因，2株攜帶 IMP-4基因，1株攜帶NDM-1基因，上述菌株還同時(shí)攜帶1~3種ESBLs基因。12株改良Hodge試驗(yàn)陰性的菌株僅攜帶DHA-1基因和/或1~2種ESBLs基因。4.84株

4、CRKP中5株外膜蛋白表達(dá)正常，3株缺失Ompk36，1株缺失Ompk35，其余75株存在外膜蛋白變異。5.4株產(chǎn)碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌轉(zhuǎn)移接合試驗(yàn)成功。6. SICU的環(huán)境樣本中共篩選出2株CRKP。7. MLST結(jié)果顯示我院CRKP臨床分離株主要為ST11型（73/84），其次為ST323型（3/84），同時(shí)還檢出ST29，ST37，ST571，ST1696，ST1721，ST1722，ST1723和ST1725型各1株，后5種類型

5、為首次發(fā)現(xiàn)的新ST型。PFGE將84株菌分為A（A1、A2、A3、A4）、B（B1、B2、B3、B4）、C（C1、C2）三個(gè)群，B3型菌株流行范圍最廣，分型結(jié)果與MLST相吻合。環(huán)境樣本中分離到的2株CRKP屬于B3型，也屬于ST11型。
　　結(jié)論：我院CRKP對(duì)碳青霉烯類抗生素的耐藥機(jī)制以產(chǎn)KPC-2酶合并外膜蛋白異常表達(dá)為主。ST11型（B3型）肺炎克雷伯菌在我院存在爆發(fā)流行，CRKP感染患者及其接觸過(guò)的物品為其重要的傳染源。