Runx2與Osx在修復性牙本質形成過程中表達的研究.pdf

1、目的:
　　齲損和外傷是能引起牙髓炎性損傷，并最終導致人類牙列缺損的重要病因。然而當牙齒發(fā)生齲損、物理摩擦，外傷等輕微損傷時，髓腔內的牙髓細胞會發(fā)生遷徙，增殖，并分化為成牙本質細胞，進而礦化成熟，成為反應性牙本質，亦稱修復性牙本質。研究牙髓的損傷后修復機制為保存患牙提供了可能。Runx相關轉錄因子2（Runt-relatedtranscription factor2，Runx2）和Osx(Osterix)是骨發(fā)生及骨形成中重要轉錄

2、因子，近期研究發(fā)現(xiàn)兩者均參與調控牙齒的發(fā)生和形成。牙本質涎磷蛋白(Dentinsialoph-osphoprotein，DSPP)是成牙本質細胞分化成熟的標志性蛋白，研究已證實其轉錄受Runx2調控。成骨相關報道中提示，Osx是Runx2的下游基因，Runx2基因有缺陷時，檢測不到Osx的表達，Osx激動子區(qū)域有Runx2特有的結合元素，Runx2通過與其相結合，直接調控Osx的表達和功能，但二者在修復性牙本質形成過程中是否發(fā)揮功能仍不

3、明了，而在牙齒發(fā)育過程中，Osx可以調節(jié)DSPP的表達。因此，本課題建立大鼠牙髓損傷模型，觀察損傷后不同時期修復性牙本質形成過程中Runx2和Osx基因表達模式的變化，初步探討Runx2和Osx與修復性牙本質形成之間的關系。
　　方法:
　　1.建立大鼠牙髓損傷模型。60只體質量約為200g的雄性大鼠隨機分為正常對照組和損傷模型組(n=10)?？鞕C球鉆在50只損傷模型組大鼠雙側下頜第一磨牙常規(guī)行開髓術，開髓后不做任何處理，以

4、髓腔暴露時間0h，3h，12h，3d及7d對損傷模型組進行分組，正常對照組不做開髓處理。隨后每組隨機選取4只灌注處死（共24只），取其雙側下頜第一磨牙及周圍下頜骨標本并制成切片，以蘇木精-伊紅(H&E)染色法確定牙髓損傷模型的建立。
　　2.觀察Runx2、Osx和DSPP的蛋白和mRNA在大鼠下頜第一磨牙修復性牙本質形成時表達模式的變化。通過免疫熒光的方法對正常對照組及損傷0h，3h，12h，3d及7d組標本制備的切片進行染色，

5、共聚焦顯微鏡下觀察Runx2、Osx和DSPP蛋白在各模型組中表達模式的變化。脫頸處死正常對照組及損傷0h，3h，12h，3d及7d組大鼠（共36只）并提取雙側下頜第一磨牙，運用實時熒光定量PCR法(Real-time PCR)，對其總RNA進行定量分析，比較Runx2、Osx和DSPP mRNA在各組模型中表達量的變化。
　　結果:
　　1.牙髓損傷后成牙本質細胞遷徙變性，損傷下方出現(xiàn)急性炎癥特征，在損傷7d，在損傷下方牙

6、髓腔內可見修復性牙本質樣結構形成。
　　2.Real-time PCR法檢測發(fā)現(xiàn):Runx2 mRNA表達量在損傷后12h最高，且顯著高于對照組(P＜0.01)，損傷后3d，Runx2 mRNA表達量顯著低于損傷后12h組(P＜0.01)，直至損傷后7d，Runx2 mRNA表達量持續(xù)降低，明顯低于損傷后12h組及3d組(P＜0.01)，但較之正常對照組其表達量有顯著差異。Osx和DSPP mRNA的表達量在損傷后0h較之對照組無

7、明顯差異(P＞0.05)，從損傷后3h開始表達量呈逐漸上升趨勢，且明顯高于對照組，組間比較均有顯著差異(P＜0.01);
　　免疫熒光染色發(fā)現(xiàn):Runx2、Osx和DSPP蛋白主要表達于損傷下方，Runx2表達呈“拋物線”狀，損傷后3天表達最為強烈(P＜0.01)，隨后逐漸下降;Osx和DSPP表達均呈逐漸上調的趨勢，Osx蛋白表達在損傷后7天上調最為明顯(P＜0.01)，而DSPP蛋白則在損傷后3天表達顯著增強(P＜0.01)。