九龍?zhí)倏傸S酮抑制壞死抗心肌缺血-再灌注損傷的作用及機制研究.pdf

1、目的：課題組前期實驗發(fā)現(xiàn)九龍?zhí)倏傸S酮（Bauhinia championiiflavones, BCF）有抗自噬和抗凋亡的作用，本實驗研究BCF對心肌缺血/再灌注損傷程序性壞死的調(diào)控作用。
　　方法：1.本實驗分為體外實驗和體內(nèi)實驗兩部分，體外實驗選取培養(yǎng)3～4 d、生長良好、搏動規(guī)律的原代心肌細胞，建立缺氧/復氧損傷（hypoxia/reoxy-genation injury，H/R，缺氧2 h./復氧12 h.及24 h.）模

2、型；體內(nèi)實驗將120只SD大鼠隨機分為假手術(shù)、模型、BCF組（20 mg?kg-1）、BCF+ Nec-1組、Necrostatin-1（0.6 mg?kg-1）五組（n=8），采取冠狀動脈左前降支結(jié)扎的方法制備大鼠心肌缺血/再灌注損傷（缺血30 min.再灌注12 h.及24 h.）模型。
　　2.體外實驗用紫外分光光度計法測定正常、模型、BCF（終濃度100 mg·L-1）、BCF+Nec-1、Nec-1（終濃度100 mg·

3、L-1）共五組心肌細胞缺氧2 h./復氧12 h.及24 h.細胞培養(yǎng)上清液T-AOC、TNF-α含量；以Western-blot法檢測受體相互作用蛋白激酶3（RIPK3）蛋白的表達；用流式細胞術(shù)檢測心肌細胞壞死率。
　　3.體內(nèi)實驗查看造模前后大鼠Ⅱ?qū)?lián)心電圖的改變，用紫外分光光度法檢測假手術(shù)、模型、BCF、BCF+Nec-1、Nec-1五組心肌缺血30min/再灌注12h.及24h.總抗氧化能力（T-AOC）及血清肌酸激酶同工

4、酶（CK-MB）、誘導型一氧化氮合酶（iNOS）活力；以 Western-blot法檢測心肌微管相關蛋白輕鏈3蛋白-Ⅱ（LC3-Ⅱ）、自噬體相關蛋白Beclin-1、受體相互作用蛋白激酶3（RIPK3）蛋白的表達。
　　結(jié)果：1.九龍?zhí)倏傸S酮對缺氧/復氧模型大鼠心肌細胞培養(yǎng)上清液T-AOC、TNF-α及心肌細胞RIPK3蛋白表達及心肌細胞壞死率的影響。
　　與模型組相比，BCF、BCF+Nec-1預處理均可顯著增加兩個測試時

5、間段T-AOC，減低TNF-α含量，下調(diào)RIPK3蛋白表達，降低心肌細胞壞死率（P<0.05）；BCF作用不及Nec-1組作用效果明顯；以BCF+Nec-1組效果最好（P<0.05）。
　　2.九龍?zhí)倏傸S酮對缺血/再灌注損傷大鼠血清T-AOC、iNOS、CK-MB及心肌組織LC3-Ⅱ、Beclin-1、RIPK3蛋白表達的影響
　　與模型組相比，BCF和 Nec-1均能增強總抗氧化力，降低血清 iNOS及 CK-MB含量，下