NECA保護心肌缺血再灌注損傷的作用機制研究.pdf

1、目的：本研究旨在探討自噬、線粒體與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在NECA保護心肌缺血再灌注損傷中的作用，為臨床心肌梗死的防治與護理提供依據(jù)。
　　方法：將56只SPF級成年雄性Wistar大鼠隨機分為假手術(shù)組（Sham組）、缺血/再灌注組（I/R組）、腺苷受體激動劑組（NECA組）和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑組（TUDCA組）4組，每組14只。使用Langendorff裝置制作大鼠離體心臟缺血/再灌注損傷模型。透射電鏡觀察心肌超微結(jié)構(gòu)的改變；Western

2、blot檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白IRE1α、XBP1s和自噬標(biāo)志蛋白Beclin1、LC3的表達水平；免疫組化觀察IRE1α、LC3的表達情況；線粒體腫脹實驗評估m(xù)PTP開放程度。
　　結(jié)果：1透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，Sham組肌絲排列致密規(guī)則，肌節(jié)結(jié)構(gòu)清晰，線粒體結(jié)構(gòu)清楚，形態(tài)完整，嵴排列整齊，基質(zhì)致密，且并未觀察到自噬小體；而I/R組大部分肌絲斷裂、缺失，肌節(jié)攣縮，可見壞死、溶解，線粒體腫脹，結(jié)構(gòu)模糊，嵴排列稀疏甚至斷裂，肌漿網(wǎng)擴張，

3、線粒體空泡變性，且觀察到大量自噬體的形成；NECA組及TUDCA組的線粒體損傷較I/R組減輕，肌絲排列較規(guī)則，肌節(jié)輕度攣縮，部分線粒體輕度水腫，無自噬體形成。2 Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)，I/R組的IRE1α、XBP1s、Beclin1和LC3蛋白表達水平與 Sham組相比明顯升高（P﹤0.05），而給予 NECA和TUDCA后能明顯抑制上述蛋白的表達水平（P﹤0.05）。3免疫組化結(jié)果顯示，Sham組基本沒有觀察到IRE1α和

4、LC3的棕黃色陽性染色區(qū)域，而心肌I/R后棕黃色陽性染色區(qū)域大大增加，給予NECA和TUDCA處理后，雖然也能觀察到小部分陽性染色區(qū)域，但相比I/R組大大減少。4線粒體腫脹實驗結(jié)果表明，I/R組線粒體吸光度顯著下降，與Sham組比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.05）；而NECA組和TUDCA組的線粒體吸光度雖也有不同程度的下降，但下降程度明顯小于I/R組（P﹤0.05）。
　　結(jié)論： NECA可通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、降低自噬和減輕線粒