GAS5通過調(diào)控CDK6的表達(dá)抑制胃癌細(xì)胞增殖的研究.pdf

1、胃癌是最常見的消化道腫瘤之一，它的發(fā)病率在所有腫瘤中位列第四，而死亡率位列第二。臨床診療技術(shù)的進(jìn)步使早期胃癌的5年生存率得到了顯著的提高，但是進(jìn)展期胃癌的預(yù)后仍不理想。因此，尋找新的有效的早期診斷指標(biāo)和治療靶點顯得尤為重要。生長停滯特異性轉(zhuǎn)錄子5(GAS5)是一種常見的長鏈非編碼RNA，最近一些證據(jù)表明GAS5在肺癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌等多種腫瘤中表達(dá)顯著下調(diào)，而提高其表達(dá)能夠抑制腫瘤細(xì)胞的增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。并且，GAS5也被發(fā)

2、現(xiàn)在胃癌組織及細(xì)胞系中低表達(dá)，它能通過調(diào)控P21和E2F1蛋白的表達(dá)抑制細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。然而，對于GAS5是否是通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期來抑制細(xì)胞增殖，目前仍不清楚。
　　目的:
　　本研究探討GAS5對胃癌細(xì)胞周期的影響及分析其相關(guān)機(jī)制。
　　方法:
　　通過熒光定量PCR法測定胃癌組織及其對應(yīng)的正常胃粘膜組織中GAS5的mRNA表達(dá)量，通過CCK-8分析GAS5對胃癌細(xì)胞增殖的影響，通過流式細(xì)胞儀檢測GAS5

3、對胃癌細(xì)胞周期的影響。并且，分別轉(zhuǎn)染pLJM-GAS5、GAS5 siRNA及其對照質(zhì)粒入胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS和MGC-803，并通過Western blotting方法測定轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中P21、CDK4和CDK6蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　熒光定量PCR法測定結(jié)果顯示:胃癌組織中GAS5的表達(dá)量明顯低于正常胃粘膜組織。GAS5的表達(dá)與胃癌組織的大小及胃癌的臨床分期呈負(fù)相關(guān)。人胃粘膜細(xì)胞系GES-1，人胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS和BGC-

4、823中GAS5的表達(dá)量低于人胃粘膜細(xì)胞系 GES-1。胃癌細(xì)胞AGS中過表達(dá)GAS5顯著抑制了AGS細(xì)胞的增殖。胃癌細(xì)胞AGS中低表達(dá)GAS5促進(jìn)了MGC-803細(xì)胞的增殖。降低MGC-803細(xì)胞中GAS5的表達(dá)導(dǎo)致G0/G1期的細(xì)胞比例降低和S及G2/M期的細(xì)胞比例升高。相反，與轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的AGS細(xì)胞相比，過表達(dá)GAS5的AGS細(xì)胞中G0/G1期細(xì)胞的分布顯著增加，而S期細(xì)胞的比例顯著降低。GAS5的過表達(dá)顯著提升了AGS細(xì)胞中P2

5、1蛋白的表達(dá)水平，并抑制了CDK6蛋白的表達(dá)水平。MGC-803細(xì)胞中GAS5的表達(dá)沉默抑制了P21蛋白的表達(dá)和增強(qiáng)了CDK6蛋白的表達(dá)。下調(diào)CDK6的表達(dá)能顯著抑制GAS5siRNA誘導(dǎo)的MGC-803細(xì)胞增殖。
　　結(jié)論:
　　胃癌組織中GAS5的表達(dá)量明顯低于正常胃粘膜組織。并且，GAS5的低表達(dá)與胃癌組織的大小及胃癌的臨床分期有關(guān)。GAS5的過表達(dá)能夠通過抑制細(xì)胞周期G1至S期的轉(zhuǎn)換從而抑制胃癌細(xì)胞的增殖。GAS5通