miRNA-497通過調(diào)控FASN的表達(dá)抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖的初步研究.pdf

1、目的：
　　通過研究miRNA-497在上皮性卵巢癌組織/細(xì)胞中的表達(dá)情況，miRNA-497對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖能力的調(diào)控，以及miRNA-497對(duì)卵巢癌中FASN基因和蛋白的表達(dá)水平的影響，探討miRNA-497與FASN之間的關(guān)系，為臨床卵巢癌診治以及選擇性靶向藥物應(yīng)用提供新的實(shí)驗(yàn)研究依據(jù)。
　　方法：
　　1.經(jīng)東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)同意，收集東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院卵巢癌患者的標(biāo)本及正常卵巢標(biāo)本進(jìn)行本實(shí)驗(yàn)研

2、究，所有標(biāo)本均取自術(shù)前未經(jīng)放化療的患者且經(jīng)病理學(xué)確診。分別提取10例上皮性卵巢癌組織及10例相關(guān)正常卵巢組織中的RNA，qPCR技術(shù)分析不同卵巢組織中miRNA-497、FASN的表達(dá)情況，通過person相關(guān)性分析方法分析二者有無相關(guān)性。
　　2.應(yīng)用qPCR技術(shù)檢測(cè)人卵巢癌細(xì)胞SKOV3、A2780中miRNA-497的表達(dá)水平。
　　3.轉(zhuǎn)染miRNA-497 mimics、miRNA-497 inhibitor至卵巢

3、上皮性癌細(xì)胞株SKOV3中，轉(zhuǎn)染miRNA-497 mimics control、miRNA-497 inhibitor control作為陰性對(duì)照，未轉(zhuǎn)染組為空白對(duì)照，CCK8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞增殖能力的變化情況。
　　4.PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后不同組別細(xì)胞中FASN的mRNA的表達(dá)情況。
　　5.Western blot方法分析轉(zhuǎn)染后不同實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞中FASN蛋白表達(dá)改變情況。
　　結(jié)果：
　　1.與正常

4、上皮性卵巢組織相比，miRNA-497在上皮性卵巢癌組織中是低表達(dá)的，F(xiàn)ASN是高表達(dá)的。pearson相關(guān)性分析表明，卵巢癌組織中miRNA-497與FASN中mRNA的表達(dá)存在負(fù)相關(guān)（r=-0.45884，p＜0.01）。
　　2.人卵巢癌細(xì)胞SKOV3、A2780中miRNA-497的表達(dá)結(jié)果顯示:SKOV3中miRNA-497的表達(dá)低于A2780，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)，故選取SKOV3細(xì)胞作為后續(xù)研究的靶細(xì)胞。<

5、br>　　3.miRNA-497可以抑制卵巢癌細(xì)胞株SKOV3細(xì)胞的增殖。CCK8結(jié)果顯示miRNA-497mimics作用SKOV3細(xì)胞后，靶細(xì)胞的細(xì)胞增殖能力明顯受到抑制，與對(duì)照組相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);miRNA-497 inhibitor作用SKOV3細(xì)胞后，靶細(xì)胞的細(xì)胞增殖能力也會(huì)相應(yīng)地提升，與對(duì)照組相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);表明miRNA-497對(duì)SKOV3細(xì)胞的生長存在抑制效應(yīng)(p＜0.05)，但

6、此效應(yīng)不會(huì)隨著作用時(shí)間的增加而增加(p＞0.05)。
　　4.miRNA-497可以抑制FASN的表達(dá)。miRNA-497 mimics作用SKOV3細(xì)胞后，可下調(diào)FASN的基因和蛋白表達(dá)，與其它對(duì)照組相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);而miRNA-497 mimics組中FASN的mRNA及蛋白的表達(dá)是下調(diào)的。這說明在卵巢癌中，miRNA-497可以抑制FASN的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1.miRNA-497在上

7、皮性卵巢癌組織中的表達(dá)較正常卵巢組織明顯降低，而FASN基因在上皮性卵巢癌組織中卻存在異常高表達(dá)，pearson相關(guān)性分析表明二者的表達(dá)水平存在負(fù)相關(guān)性。
　　2.miRNA-497體外顯著抑制卵巢癌SKOV3細(xì)胞的生長、增殖，對(duì)卵巢癌細(xì)胞的生物學(xué)特性有一定影響，但此抑制效應(yīng)與作用時(shí)間的長短無明顯關(guān)聯(lián)。
　　3.卵巢癌中miRNA-497可以調(diào)控FASN的表達(dá)水平，F(xiàn)ASN是miRNA-497的靶基因。miRNA-497可能