腫瘤干細胞的分離鑒定.pdf

1、原創(chuàng)性聲明】8S9162本人鄭重聲明：所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本聲明的法律責任由本人承擔。|學位論文作者：厲狁日物1年學位論文使用授權(quán)聲明萬月7日)本人在導師指導下完成的論文及相關(guān)的職務作品，知識產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學。根據(jù)鄭州大學有關(guān)保留、使用學位論文

2、的規(guī)定，同意學校保留或向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學可以將本學位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復制手段保存論文和匯編本學位論文。本人離校后發(fā)表、使用學位論文或與該學位論文直接相關(guān)的學術(shù)論文或成果時，第一署名單位仍然為鄭州大學。保密論文在解密后應遵守此規(guī)定。，學位論文作者：日易月7日I鄭州人學博Ij論文摘要摘要研究背景與目的：近年來研究發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中

3、存在一群具有自我更新以及多向分化等一系列正常干細胞特征的細胞，它們具有自己特異表達的分子，這群細胞被命名為腫瘤干細胞(cancerstemcelisortumorstemcells，CSCsorTSCs)。盡管腫瘤于細胞在腫瘤組織中所占比例很低，但它們具有很強的致瘤性，對放療、化療不敏感，是腫瘤復發(fā)和轉(zhuǎn)移的根源。SP細胞(sidepopulationcell，SPcell，側(cè)群細胞)是利用DNA熒光染料Hoechst33342和流式細胞

4、技術(shù)發(fā)現(xiàn)的特殊細胞亞群，這群細胞利用細胞膜上的ABC轉(zhuǎn)運子家族蛋白將Hoechst33342泵出細胞，它們具有自我更新、多向分化等一系列干細胞的生物學特征。目前已經(jīng)在多種正常組織和一些實體腫瘤中分離得到了SP細胞，初步闡明了SP細胞的一系列生物學特征。并非所有的SP細胞都是干細胞，SP細胞只是富含了干細胞，在SP細胞中具有最強泵出Hoechst33342能力的細胞被稱為“Tip“SP細胞，它們富含了最多的干細胞。食管癌(Esophage

5、alcarcinoma)是中國的發(fā)病率很高的腫瘤，但是迄今為止對食管癌干細胞的研究仍未見報道。本研究擬通過對食管癌細胞系中“Tip“SP細胞的研究，了解食管癌干細胞的生物學特征，為食管癌的有效靶向性治療提供新思路。肺癌是世界發(fā)病率第一的腫瘤，盡管有文獻報道CDl33是肺癌的干細胞標記，但目前對其生物學特性仍了解甚少。本研究應用我們首創(chuàng)的原代腫瘤細胞培養(yǎng)新方法建立原代培養(yǎng)的肺癌細胞系，在此基礎(chǔ)上分離鑒定肺癌干細胞標記，為深入研究它們的生物

6、學特性打下基礎(chǔ)。研究方法：對數(shù)生長期的食管癌細胞系用Hoechst33342染色，對比維拉帕米抑制試驗，在流式細胞儀上設門Hoechst33342熒光陽性的非SP細胞(nonsidepopulationcell，NSPcell)和熒光陰性／弱陽性的SP細胞群。然后無菌分選收集NSP細胞和熒光表達最弱的“Tip”SP細胞，研究他們生物學性狀的差異，包括對比它們的平板克隆形成能力，分析它們的自我更新和多向分化能力，用WesternBlot檢