肝癌細胞中干細胞亞群的分離、培養(yǎng)、鑒定及特征初探.pdf

1、第一軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文肝癌細胞中干細胞亞群的分離、培養(yǎng)、鑒定及特征初探姓名：劉勝軍申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)普通外科學(xué)指導(dǎo)教師：方馳華20070408中丈摘要群后行體外增埴、分化能力及體內(nèi)成瘤能力驗證，町能是從腫瘤組織中分離腫瘤干細胞的一種行之有效的辦法。由F缺乏適。i[的培養(yǎng)方法和高效的分選方案，目前尚未見成功分離、鑒定b培養(yǎng)肝癌細胞中F細胞、亞群的報道。根掘上述研究結(jié)果，利用肝臟F細胞的部分表面標志，存此基礎(chǔ)七進行體外增殖、分

2、化試驗和體內(nèi)成瘤試驗，有望分離出肝癌干細胞并建立島效的分選方案。因此，本課題采用肝臟的干細胞一卵圓細胞的部分表面標志來進行肝癌干細胞的分選。卵圓細胞是肝臟中的一類干細胞，具有雙向分化潛能，既可分化為肝細胞又可分化為膽管細胞。近來一系列相關(guān)研究支持卵圓細胞產(chǎn)塵肝癌的觀點，提示町以利用卵圓細胞的部分表面標志進行肝癌干細胞的分選。我們在前期的研究中原代培養(yǎng)原發(fā)性肝癌(primaryhepaticcarcinoma，PHC：肝細胞癌：hepat

3、ocellularcarcinoma，HCC)細胞，選用卵圓細胞表面標記CD34、ckit，Thy1、CK7、CKl4和CKl9，通過親和板結(jié)合分離法分離肝癌細胞亞群，發(fā)現(xiàn)以CD34、ckit、CK7等3個標記分選的相應(yīng)的細胞亞群之間裸鼠移植成瘤能力差異有統(tǒng)計學(xué)意義(PO05)。降低移植細胞的數(shù)量后，CD34‘、CK7、c—kit肝癌細胞亞群成瘤能力仍強于對應(yīng)的CD34、CK7一、ckit‘肝癌細胞亞群，但細胞移植成瘤率下降。出現(xiàn)上述結(jié)

4、果的原因可能有兩個：一是因為親和板結(jié)合分離法所得、正群細胞純度不高，混雜細胞影響了成瘤結(jié)果；二是僅僅靠單一表面標志抗原進行分選所得的亞群細胞無法完全將肝癌干細胞與非肝癌干細胞分離。另外，成瘤結(jié)果的統(tǒng)計學(xué)分析顯示，分選后細胞亞群成瘤能力差別較大的表面標志依次是ckit、CK7、CD34。因此，利用分選效率和分選細胞純度較高的分選方法，依次以上述3種表面標志或其組合及體內(nèi)外增殖、成瘤能力驗證有望從肝癌細胞中分離肝癌干細胞。目的1比較流式細胞