神經(jīng)元型一氧化氮合酶在大鼠海馬齒狀回的表達特征.pdf

1、研究背景和目的:
　　 中間神經(jīng)元(interneuron)指的是那些分布于興奮性主細胞周圍，軸突投射局限于其胞體所在腦區(qū)，對主細胞(principal cell)的興奮性起調(diào)節(jié)作用的神經(jīng)細胞。中間神經(jīng)元特異性地表達一些分子標志物，常見的有以下幾類：鈣結(jié)合蛋白類包括小白蛋白(PV)、鈣視網(wǎng)膜蛋白(CR)和鈣結(jié)合蛋白(CB)，神經(jīng)肽類如生長抑素(SOM)、神經(jīng)肽Y(NPY)、膽囊收縮素(CCK)和血管活性腸肽(VIP)等，酶類以及

2、受體類等。雖然不是全部但有些分子標志物的表達與部分中間神經(jīng)元的分布、形態(tài)、放電類型、軸突投射以及功能有密切聯(lián)系。
　　 一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，nNOS)催化L-精氨酸氧化生成一氧化氮和L-瓜氨酸。nNOS有三種類型，分別為神經(jīng)型一氧化氮合酶(nNOS)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)和誘導型一氧化氮合酶(iNOS)。研究發(fā)現(xiàn)nNOS在部分中間神經(jīng)元有較強的表達，且不同腦區(qū)nNOS陽性中間神經(jīng)元

3、的分布密度不同，但到目前為止對表達nNOS中間神經(jīng)元的分布、解剖特征、電生理學性質(zhì)、軸突投射以及它們在神經(jīng)網(wǎng)絡中的作用所知甚少。本課題利用免疫組織化學研究了大鼠海馬齒狀回nNOS陽性中間神經(jīng)元的分布特征、GABA能性以及與其它常見中間神經(jīng)元分子標記物的共表達。
　　 材料和方法:
　　 實驗動物為成年雄性SD大鼠(體重450±50 g，11-13周齡)。腹腔內(nèi)注射戊巴比妥鈉麻醉后，以4％多聚甲醛經(jīng)心臟灌流進行組織固定，取

4、腦。隨后將腦浸泡在同樣的固定液中過夜。在以階梯增加的蔗糖磷酸緩沖液保護、明膠，卵白蛋白-戊二醛混合液包埋腦組織標本后，用振動切片機制作60微米厚的水平面海馬腦片。每隔八張腦片取一張作為樣本，以漂染法對腦片進行免疫熒光雙標。所用一抗為抗nNOS、谷氨酸脫羧酶67(GAD67)、SOM、NPY、VIP和PV等。以普通熒光纖維鏡對標本進行觀察、拍照后，對海馬齒狀回不同層分別進行陽性細胞計數(shù)和面積測定，以此計算單位面積中nNOS陽性神經(jīng)元數(shù)(細

5、胞數(shù)/mm2)。對部分切片以共聚焦進行掃描。
　　 結(jié)果:
　　 對兩種不同來源的nNOS抗體進行熒光雙染證明由這兩種抗體所致免疫熒光完全重合。在海馬齒狀回分子層、顆粒細胞層和門區(qū)，nNOS陽性細胞的密度分別為23.1±1.9/mm2、24.1±10.7/mm2和143.1±13.8/mm2。nNOS/GAD67免疫熒光雙標顯示分子層和顆粒細胞層nNOS陽性細胞與GAD67有共表達的百分率分別為96.2±2.5%(n=6

6、)，95.6±5.6%(n=6)，但在門區(qū)，nNOS陽性細胞表達GAD67的百分率僅為82.3±4.7%。上述結(jié)果提示nNOS在齒狀回的表達具有層特異性。通過nNOS與PV、NPY、SOM和VIP的免疫熒光雙標，我們發(fā)現(xiàn)在門區(qū)，nNOS陽性中間神經(jīng)元與PV、NPY、SOM和VIP有共表達的百分率分別為8.6±2.6%、10.3±0.6%、13.8±3.0%和1.6±0.5%。
　　 結(jié)論:
　　 1.在大鼠海馬齒狀回中，