2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  明確自噬與非小細胞肺癌吉非替尼獲得性耐藥的相關性,同時闡明調控靶點HMGB1在自噬介導的吉非替尼NSCLC獲得性耐藥中的關鍵作用,以及Bcl-2和Beclin-1信號通路與HMGB1及吉非替尼NSCLC獲得性耐藥的關系。
  方法:
  1.在吉非替尼敏感NSCLC細胞系PC9(EGFR19外顯子缺失)上,經吉非替尼處理不同時間,構建吉非替尼獲得性耐藥細胞株PC9-R(EGFR T790M、Met擴增均為陰

2、性)。通過AO染色檢測酸性囊泡、Western blot檢測耐藥過程不同階段自噬標志蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ、p62(SQSTM)表達,明確在吉非替尼獲得性耐藥與自噬的相關性。
  2.采用小分子RNA干擾技術/脂質體轉染技術,構建沉默/過表達HMGB1的PC9細胞,以不同濃度吉非替尼處理后,MTT法檢測考察抗腫瘤活性,Western blot檢測自噬標志蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ、p62表達,免疫組化法檢測LC3Ⅰ/Ⅱ的分布,明確HMGB1對自噬

3、調控及吉非替尼獲得性耐藥的影響。
  3.針對信號轉導通路HMGB1/B eclin和MAPK/Bcl2/HMGB1,以Western blot為檢測吉非替尼獲得性耐藥中Beclin-1、Bcl2、pJNK、pERK和p38表達的變化,考察自噬誘導的吉非替尼獲得性耐藥中HMGB1與Beclin-1和Bcl2的相互作用和結合情況。
  結果:
  1.吉非替尼耐藥過程中,自噬標志蛋白LC3發(fā)生Ⅰ型向Ⅱ型的轉化、p62表達

4、下降,表明吉非替尼獲得性耐藥過程中出現(xiàn)自噬。采用自噬抑制劑氯喹以及RNA干擾阻斷技術調控自噬水平,通過MTT法檢測發(fā)現(xiàn)抑制自噬的發(fā)生可以明顯增加吉非替尼的抗腫瘤活性,證明自噬介導吉非替尼獲得性耐藥的發(fā)生。
  2.在構建的吉非替尼獲得性耐藥細胞株PC9/R中,耐藥過程中HMGB1的表達明顯上調;沉默HMGB1的表達,吉非替尼的抗腫瘤活性明顯增強,表明HMGB1參與吉非替尼獲得性耐藥的發(fā)生。另外,在沉默HMGB1表達后自噬標志蛋白L

5、C3Ⅰ型向Ⅱ型轉變減少、p62的下調被逆轉,證明HMGB1通過介導自噬過程發(fā)揮調控吉非替尼獲得性耐藥。
  3.吉非替尼獲得性耐藥中Beclin-1以及pBcl2表達上調,Bcl2表達減少;抑制Beclin-1能明顯增強吉非替尼的抗腫瘤效果,說明Beclin-1參與吉非替尼獲得性耐藥的發(fā)生。在自噬誘導的吉非替尼獲得性耐藥中HMGB1與Beclin-1的結合明顯增多,促進自噬介導的吉非替尼獲得性耐藥的發(fā)生。
  結論:

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