肝X受體激動劑GW3965對與EMT相關(guān)的非小細(xì)胞肺癌獲得性吉非替尼耐藥的逆轉(zhuǎn)及機制研究.pdf

1、目的:
　　探討上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化與獲得性吉非替尼耐藥的關(guān)系及相關(guān)標(biāo)志物在獲得性耐藥前后的變化，并研究肝X受體的人工合成激動劑GW3965對獲得性吉非替尼耐藥的逆轉(zhuǎn)與EMT過程相關(guān)性及具體分子機制，旨在為今后肝X受體及吉非替尼耐藥研究提供新的思路。
　　方法:
　　取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，觀察細(xì)胞形態(tài)并經(jīng)倒置顯微鏡圖像采集系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)胞拍照采集圖像信息;Transwell實驗檢測不同細(xì)胞株侵襲能力差異，并用倒置顯微鏡采集圖像并

2、統(tǒng)計;調(diào)閱耐藥株HCC827/GR-8-1與親本HCC827細(xì)胞差異基因表達(dá)芯片數(shù)據(jù)EMT相關(guān)標(biāo)志物編碼基因表達(dá)差異;RT-PCR檢測不同敏感性細(xì)胞株間VIM表達(dá)量差異;Western blot及免疫組化檢測差異波形蛋白表達(dá)量差異;CCK-8實驗檢測LXR激動劑的單獨應(yīng)用對細(xì)胞毒力作用，及兩藥聯(lián)合應(yīng)用對吉非替尼敏感性的影響;克隆形成實驗檢測GW3965單獨或聯(lián)合應(yīng)用吉非替尼對增殖的影響;Western blot進(jìn)一步驗證兩藥聯(lián)用對細(xì)胞凋

3、亡蛋白表達(dá)量的影響;Western blot檢測兩藥聯(lián)合過程對EMT相關(guān)標(biāo)志物尤其是波形蛋白表達(dá)量的影響并分析兩藥聯(lián)用后細(xì)胞增殖及蛋白表達(dá)量變化及其與細(xì)胞耐藥性關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　細(xì)胞形態(tài)觀察顯示耐藥的細(xì)胞間質(zhì)特征更明顯。侵襲實驗顯示HCC827及H358侵襲能力弱，而H1299、H1975侵襲能力強，獲得性耐藥株侵襲能力也上升。對吉非替尼不敏感的細(xì)胞株VIM表達(dá)量高，Western blot及免疫組化同樣顯示H1975

4、、H1299級獲得性耐藥株波形蛋白表達(dá)量顯著增高。EMT及相關(guān)主要標(biāo)志物波形蛋白與吉非替尼耐藥性正相關(guān)。LXR激動劑單獨或聯(lián)合吉非替尼處理獲得性耐藥株HCC827/GR-8-1細(xì)胞后，CCK-8結(jié)果顯示GW3965對細(xì)胞無明顯毒力作用。但在多株耐藥株中可顯著增高細(xì)胞對吉非替尼敏感性，克隆形成實驗同樣顯示，GW3965聯(lián)合吉非替尼組細(xì)胞克隆形成率顯著低于單用吉非替尼組。凋亡蛋白檢測顯示兩藥聯(lián)用可增加凋亡蛋白如caspase-3等的表達(dá)，降