齊墩果酸通過激活血紅素氧化酶Ⅰ型-Sestrin2信號通路減輕小鼠肝臟缺血-再灌注損傷.pdf

1、在肝移植和肝切除術中，一段時間的肝臟缺血和血液的重新復灌會導致肝缺血再灌注損傷(ischemia-reperfusion injury，IPI)，肝臟IRI可造成高達10％的早期肝功能衰竭并增加了移植肝臟急/慢性排斥反應的發(fā)生率。研究表明，氧化應激損傷在肝臟IR損傷中發(fā)揮重要作用。氧化應激可通過啟動細胞損傷的“瀑布樣”級聯(lián)放大效應，引起細胞的壞死/凋亡和炎癥細胞浸潤，最終，產(chǎn)生大量的細胞因子和炎癥因子影響損傷肝臟的恢復。因此，減少氧化應

2、激損傷傳統(tǒng)意義上被認為是一種減輕肝臟IR損傷的有效治療方法。
　　研究證明齊墩果酸(oleanolic acid，OA)，作為許多草藥及植物的天然成分，具有強力的抗氧化活性，可以保護細胞和組織免受氧化應激損傷。在慢性環(huán)孢霉素腎病中OA在很大程度上可能通過激活Nrf2(nuclear factor-erythroid2 relatedfactor2，核因子E2相關因子2)，引起HO-1(heme oxygenase-1，血紅素加氧酶

3、-1)表達上調(diào)從而發(fā)揮抗氧化應激的作用，而在肝損傷中OA可能激活磷酸肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K)/絲氨酸/蘇氨酸激酶(Serine/threonine Kinase，Akt)信號通路減輕肝臟氧化應激損傷。目前研究表明，在肝臟IRI中，OA具有減輕肝臟IRI的保護作用。然而關于其機制的研究目前仍然不是很清楚，相關文獻報道較少。
　　目的:本研究通過建立小鼠肝臟IR模型，結(jié)合術前

4、給藥，研究OA在小鼠肝臟缺血再灌注損傷中對肝臟的保護作用并其可能的相關機制。
　　方法:成功建立小鼠部分熱缺血肝臟IR的模型，并按照實驗要求分別給予實驗組小鼠OA和二價鋅原卟啉Ⅸ(Zn(Ⅱ) protoporphyrinⅨ，ZnPP)（HO-1的一種抑制劑）。本實驗選擇小鼠為C57BL/6野生型，共48只，電腦隨機分成8個組:只行IR組(IR，n=6)及其對照組，僅給予OA的IR組（OA/OA+IR組，n=6)及其對照組，僅給予Z

5、nPP的IR組（ZnPP/ZnPP+IR組，n=6）及其對照組，同時給予OA與ZnPP的IR組（OA+ZnPP+IR組，n=6）以及其對照組。四個相應對照組小鼠手術中不阻斷肝血流，其余手術過程與實驗組小鼠手術過程相同，即假手術。于術后6小時即實驗組小鼠肝臟復灌后6小時將所有小鼠放血處死。收集血清標本用于檢測ALT和AST水平，收集肝臟組織標本用于病理學檢測并通過Western和Real-time PCR技術檢測HO-1、Sesn2等的表

6、達。
　　結(jié)果:與對照組及IR組相比，OA預處理組ALT的含量明顯較低(P＜0.05)，肝損傷較輕，HO-1，PI3K/Akt和Sesn2表達上調(diào)較明顯(P＜0.05)。通過使用抑制劑抑制HO-1的表達，對比OA預處理組，ZnPP預處理組小鼠肝損傷明顯加重(P＜0.01)，ALT與AST明顯升高，肝細胞腫脹壞死明顯，同時HO-1和Sesn2的表達明顯降低(P＜0.01)。這表明在肝臟肝IRI中OA能夠激活Sesn2并通過HO-1/