萊菔硫烷通過Nrf2-ARE通路減輕大鼠移植心臟冷缺血再灌注損傷.pdf

1、目的：觀察 Nrf2-ARE通路對大鼠心臟移植冷缺血再灌注損傷的影響及萊菔硫烷保護大鼠移植心臟的相關機制。
　　方法：1實驗模型的建立和分組：健康雄性 Sprague-Dawley（SD）大鼠40只隨機分成3組：Sham組（假手術組，n=8），I/R組（缺血再灌注組，n=16），I/R+SFN組（萊菔硫烷預處理組，n=16）。Sham組：僅行開/關腹手術，術前24h經鼠尾靜脈注射等量的生理鹽水；I/R組：受體于移植前24h經鼠尾靜

2、脈注射等量的生理鹽水；I/R+SFN組：受體于移植前24h經尾靜脈注射 SFN2.5 mg/kg；其中I/R組和I/R+SFN組均將冷藏于4℃HTK液9 h的供心移植到受體大鼠腹腔，建立大鼠同種異體異位心臟移植模型，移植后24h兩組均將移植心臟取出；Sham組開/關腹24h后取自體心臟。2檢測指標：心肌酶學：再灌注后6h、24h分別從受體鼠眼內眥靜脈取血，檢測血清中乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌鈣蛋白 T（TnT

3、）的水平。采用硫代巴比妥酸法（TBARS）法、黃嘌呤氧化酶法分別檢測心肌組織中脂質過氧化物（LPO）含量及超氧化物歧化酶（SOD）的活性。用HE染色法觀察各組心臟移植后供心心肌組織學變化。應用免疫組織化學法（EnVision兩步法）及免疫蛋白印跡法觀察Nrf2、HO-1和NQO1在各組心臟移植后24h供心心肌組織的蛋白表達水平。
　　結果：心肌酶學：與 Sham組比較，I/R組，I/R+SFN組血清中 LDH、CK-MB、TnT含

4、量明顯升高（P＜0.05）；萊菔硫烷預處理后，缺血再灌注6h，與 I/R組比較，I/R+SFN組血清中 LDH、CK-MB、TnT含量明顯降低（P＜0.05），再灌注24h，I/R+SFN組TnT含量、CK-MB活性、LDH活性明顯降低（P＜0.05）。心肌組織中LPO含量及SOD的活性：與Sham組相比，I/R組和I/R+SFN組心肌組織SOD活性明顯降低（P＜0.05），而心肌組織 LPO含量明顯升高（P＜0.05）；與I/R組比較

5、，I/R+SFN組心肌組織SOD活性未見明顯變化；而心肌組織LPO含量顯著降低（P＜0.05）。心肌組織學：Sham組：心肌纖維排列整齊，結構清楚，無心肌纖維的破壞，組織間隙無炎細胞滲出，胞核清晰。I/R組：心肌細胞結構紊亂、較多心肌纖維斷裂、大量中性粒細胞浸潤；I/R+SFN組：心肌結構較清楚，心肌纖維排列較整齊，心肌組織中心肌間質散在中性粒細胞浸潤。心肌組織 Nrf2及其下游分子 HO-1和NQO1蛋白表達：Sham組：心肌組織內

6、Nrf2蛋白幾乎不表達、HO-1蛋白弱表達、NQO1蛋白也是弱表達。與Sham組比較，I/R組心肌組織Nrf2核蛋白、Nrf2、HO-1和NQO1蛋白水平顯著升高（P＜0.01）；與 I/R組比較，I/R+SFN組心肌組織 Nrf2核蛋白、Nrf2、HO-1和NQO1蛋白水平顯著升高（P＜0.01），但與 Sham組比較，心肌組織 Nrf2核蛋白、Nrf2、HO-1和NQO1蛋白水平仍高于正常（P＜0.01）。
　　結論：1心臟移