wnt-β-catenin信號(hào)通路對(duì)膿毒癥急性肺損傷的影響.pdf

1、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)是感染、創(chuàng)傷、中毒、急性胰腺炎、休克等心源性因素以外的各種肺內(nèi)外致病因素導(dǎo)致的急性、進(jìn)行性、頑固性低氧血癥和呼吸衰竭。目前，ARDS病理生理機(jī)制還不是很清楚。其病理改變主要表現(xiàn)為：肺泡上皮細(xì)胞損傷，肺血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷并毛細(xì)血管通透性增大，大量膠原蛋白沉積，大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)并釋放過(guò)量炎性介質(zhì)，肺泡水腫或者塌陷、肺泡間隔增寬和肺纖維化的形成。有研究發(fā)現(xiàn)wnt/β-catenin信號(hào)通路在ARDS患者的肺泡上皮細(xì)

2、胞損傷和肺組織纖維化過(guò)程過(guò)中被異常激活，這提示W(wǎng)nt/β-catenin信號(hào)通路可能在ARDS過(guò)程中起作用?？紤]到Wnt/β-catenin信號(hào)通路可能參與ARDS過(guò)程，本實(shí)驗(yàn)以Wnt/β-catenin信號(hào)通路為研究靶點(diǎn)，采用盲腸結(jié)扎（CLP）術(shù)建立SD大鼠膿毒癥急性肺損傷模型；通過(guò)腹腔注射XAV939小分子化合物抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路來(lái)觀察Wnt/β-catenin信號(hào)通路對(duì)膿毒癥急性肺損傷的影響。這將為通過(guò)調(diào)節(jié)Wn

3、t/β-catenin信號(hào)通路來(lái)治療膿毒癥急性肺損傷這一新策略提供重要的理論基礎(chǔ)。
　　考慮到Wnt/β-catenin信號(hào)通路可能參與ARDS過(guò)程，本實(shí)驗(yàn)以Wnt/β-catenin信號(hào)通路為研究靶點(diǎn)，采用盲腸結(jié)扎（CLP）術(shù)建立SD大鼠膿毒癥急性肺損傷模型；通過(guò)腹腔注射XAV939小分子化合物抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路來(lái)觀察Wnt/β-catenin信號(hào)通路對(duì)膿毒癥急性肺損傷的影響。這將為通過(guò)調(diào)節(jié)Wnt/β-cat

4、enin信號(hào)通路來(lái)治療膿毒癥急性肺損傷這一新策略提供重要的理論基礎(chǔ)。
　　研究目的：
　　探討Wnt/β-catenin信號(hào)通路對(duì)膿毒癥急性肺損傷的影響。
　　研究方法：
　　選取250±10g健康成年SD雄性大鼠50只，隨機(jī)分為三組：第一組：對(duì)照組（control組），共10只，僅進(jìn)行麻醉后，打開(kāi)腹腔，找到盲腸后放回腹腔，給予縫合處理；第二組：膿毒癥急性肺損傷組（CLP組），共20只，具體操作過(guò)程見(jiàn)實(shí)驗(yàn)部分；第

5、三組：用藥組（CLP+XAV939組），共20只，在CLP術(shù)后， CLP+XAV939組大鼠在術(shù)后第一天和第二天給予腹腔注射XAV939處理，具體操作過(guò)程見(jiàn)實(shí)驗(yàn)部分。
　　觀察對(duì)照組、CLP組和CLP+XAV939組三組大鼠之間活動(dòng)度以及死亡率的差異。48小時(shí)后處死大鼠并取大鼠肺組織進(jìn)行下一步檢測(cè)。采用Westen-Blot（WB）技術(shù)檢測(cè)肺組織內(nèi)Wnt信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白的表達(dá)情況和肺組織內(nèi)炎性因子表達(dá)情況；肺組織病理切片觀察大鼠肺

6、組織病理?yè)p傷程度的變化情況；免疫組化(IHC)和免疫熒光(IF)實(shí)驗(yàn)手段檢測(cè) Wnt信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白在肺組織內(nèi)的表達(dá)量和表達(dá)部位；實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time PCR)技術(shù)觀察Wnt信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白基因表達(dá)水平的變化情況。
　　研究結(jié)果：
　　CLP術(shù)成功建立膿毒癥感染模型。CLP組與control組比較發(fā)現(xiàn)：CLP組大鼠組在48小時(shí)內(nèi)死亡率為40％而control組大鼠死亡率為0，CLP組大鼠嗜睡，活動(dòng)明顯減少，體重

7、下降約20%；CLP組大鼠肺組織內(nèi)炎性因子TNF-α表達(dá)量明顯升高；CLP組大鼠肺組織病理切片觀察到肺泡水腫和塌陷，肺泡間隔增厚增寬并大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肺血管充血明顯；WB檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在CLP組中Wnt信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白β-catenin及CyclinD等表達(dá)量較control組明顯升高；IHC提示CLP組大鼠肺組織內(nèi)炎癥細(xì)胞，支氣管上皮細(xì)胞，肺泡細(xì)胞等細(xì)胞均有大量β-catenin蛋白表達(dá)；IF中也顯示在CLP組大鼠肺組織內(nèi)表達(dá)大量胞膜蛋白

8、LRP5/6；Real-time PCR顯示在CLP組大鼠肺組織內(nèi)β-catenin mRNA表達(dá)量升高。
　　給予腹腔注射XAV939抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路后CLP+XAV939組與CLP組比較發(fā)現(xiàn)：CLP+XAV939組大鼠死亡率為0；CLP+XAV939組大鼠活動(dòng)度與control無(wú)明顯差異；CLP+XAV939組大鼠體重下降率為10%，下降率小于 CLP組；CLP+XAV939組大鼠肺組織病理切片發(fā)現(xiàn)肺病理

9、損傷程度較CLP組明顯減輕；CLP+XAV939組大鼠肺組織內(nèi)炎性因子TNF-α和β-catenin蛋白、CyclinD蛋白表達(dá)量較CLP組均明顯降低；Real-time PCR顯示CLP+XAV939組大鼠肺組織內(nèi)β-catenin的mRNA表達(dá)量較control組無(wú)明顯差異，但是較CLP組明顯降低。
　　研究結(jié)論：
　　在本研究中，通過(guò)對(duì)膿毒癥動(dòng)物模型的研究發(fā)現(xiàn)Wnt/β-catenin信號(hào)通路參與膿毒癥急性肺損傷過(guò)程；