布洛芬對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2增殖、凋亡及wnt-β-catenin信號(hào)通路的影響的研究.pdf

1、目的：用非甾體類抗炎藥布洛芬作用于肝癌細(xì)胞HepG2，觀察其細(xì)胞增殖、凋亡的變化，并從分子水平研究布洛芬對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞的wnt/β-catenin信號(hào)通路的關(guān)鍵蛋白β-catenin及下游重要靶基因cyclin D1、c-myc的影響，探討布洛芬抑制肝癌的可能分子機(jī)制，從而為臨床上進(jìn)一步應(yīng)用此藥物治療肝癌奠定基礎(chǔ)。 方法：體外培養(yǎng)HepG2細(xì)胞，以MTT法檢測(cè)不同濃度布洛芬分別作用HepG2細(xì)胞24、48、96h后細(xì)胞

2、增殖情況；應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)布洛芬處理HepG248h后β-catenin、cyclin D1、c-myc轉(zhuǎn)錄水平的變化；westernblotting檢測(cè)布洛芬對(duì)HepG2中β-catenin蛋白表達(dá)量的影響；免疫細(xì)胞化學(xué)法觀察布洛芬處理HepG2細(xì)胞后β-catenin的亞細(xì)胞定位；流式細(xì)胞儀檢測(cè)布洛芬對(duì)HepG2細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果：0.7 mmol/L的布洛芬處理細(xì)胞48h后能明顯見到細(xì)胞增殖受到抑制，抑制率達(dá)到53

3、.8％±1.56％；RT-PCR結(jié)果顯示布洛芬處理后細(xì)胞的β-catenin、cyclin D1、c-myc轉(zhuǎn)錄也受到顯著抑制；Western印跡結(jié)果表明布洛芬處理組細(xì)胞中β-catenin蛋白表達(dá)低于未處理組；免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示未處理組的β-catenin在細(xì)胞中主要定位于胞核，而布洛芬處理后β-catenin在胞核中定位減少，胞漿定位增多；流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示布洛芬能誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡。上述作用都有時(shí)間和劑量依賴性。 結(jié)

4、論：1.布洛芬能顯著抑制肝癌細(xì)胞HepG2的增殖，誘導(dǎo)其凋亡，且隨著處理時(shí)間和藥物濃度的增加，這種作用逐漸增強(qiáng)；2.布洛芬能影響肝癌細(xì)胞HepG2的形態(tài)，改變其貼壁屬性，下調(diào)β-catenin基因和蛋白的表達(dá)，改變?chǔ)?catenin的亞細(xì)胞定位，下調(diào)wnt/β-catenin信號(hào)通路下游重要靶基因cyclin D1、c-myc的轉(zhuǎn)錄；3.布洛芬引起肝癌細(xì)胞HepG2的的增殖與凋亡的改變可能與調(diào)控wnt/β-catenin信號(hào)通路，抑制下