C反應(yīng)蛋白對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞總脂聯(lián)素和高分子量多聚體脂聯(lián)素的影響及其調(diào)控機(jī)制.pdf

1、目的：
　　觀察C反應(yīng)蛋白(CRP)對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞總脂聯(lián)素(Adiponectin)及各聚體表達(dá)的影響，并進(jìn)一步探討其調(diào)控機(jī)制。
　　方法：
　　1.3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化成熟后，予 CRP重組蛋白干預(yù)，分別用Real-time PCR觀察總脂聯(lián)素mRNA變化， Western blot方法明確其對(duì)脂聯(lián)素以及高分子量脂聯(lián)素蛋白表達(dá)的影響。
　　2.細(xì)胞免疫熒光方法檢測(cè)CRP干預(yù)后，3T3-L1脂肪

2、細(xì)胞脂聯(lián)素蛋白表達(dá)變化。
　　3.Western blot檢測(cè) CRP刺激后，總脂聯(lián)素及各聚體（低聚體（low-molecular-weight, LMW）、中聚體（middle-molecular-weight, MMW）、高聚體（high-molecular-weight, HMW））表達(dá)變化。Real-time PCR檢測(cè)脂聯(lián)素多聚化相關(guān)調(diào)控基因Erp44、Ero1-α和DsbA-L表達(dá)水平。
　　4.3T3-L1前脂

3、肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化成熟后，分別加入 CRP、磷脂酰肌醇3酶（ phosphatidylinositol3 kinase, PI-3K）信號(hào)通路抑制劑LY294002、蛋白激酶B（PKB/Akt）磷酸化抑制劑T3830，real-time PCR、Western blot等方法，檢測(cè)總脂聯(lián)素mRNA和蛋白表達(dá)水平，Western blot方法檢測(cè)高分子量多聚體脂聯(lián)素表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.Real-time PCR及Wes

4、tern blot結(jié)果均顯示，作用24h后，5μg/mL CRP對(duì)總脂聯(lián)素?zé)o明顯影響，25μg/mL CRP對(duì)總脂聯(lián)素表達(dá)的抑制具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，50μg/mL CRP對(duì)總脂聯(lián)素的抑制作用更為明顯，呈劑量依賴。50μg/mL CRP干預(yù)6h后，總脂聯(lián)素表達(dá)無(wú)變化，干預(yù)12h對(duì)總脂聯(lián)素產(chǎn)生抑制作用，而24h更明顯，呈時(shí)間依賴。
　　2.免疫熒光顯示，50μg/mL顯著抑制3T3-L1脂肪細(xì)胞內(nèi)脂聯(lián)素表達(dá)。
　　3. Wester

5、n blot結(jié)果顯示，作用24h后，5μg/mL CRP對(duì)高分子量多聚體脂聯(lián)素?zé)o明顯影響，25μg/mL CRP顯著抑制高分子量多聚體脂聯(lián)素蛋白表達(dá)，50μg/mL CRP的抑制作用更為明顯，呈劑量依賴。50μg/mL CRP干預(yù)細(xì)胞6h后，高分子量多聚體脂聯(lián)素?zé)o明顯變化，12h后，高分子量多聚體脂聯(lián)素蛋白表達(dá)顯著降低，24h后更明顯，呈時(shí)間依賴。
　　4. Western blot結(jié)果顯示，50μg/mL CRP作用24h后，總

6、脂聯(lián)素表達(dá)降低。低聚體無(wú)顯著變化，中聚體表達(dá)降低，高分子量多聚體表達(dá)降低且更為明顯。HMW/total adiponectin比值降低。Real-time PCR顯示，adiponectin多聚化相關(guān)基因Erp44表達(dá)上升，Ero1-α與DsbA-L表達(dá)下降。
　　5.在3T3-L1脂肪細(xì)胞中，分別加入PI3K抑制劑LY294002和Akt磷酸化抑制劑T3830，結(jié)果顯示，均可部分逆轉(zhuǎn)CRP對(duì)脂聯(lián)素的抑制作用。
　　結(jié)論：<