基于數(shù)據(jù)挖掘發(fā)現(xiàn)加味補中益氣湯中AChE抑制劑的研究.pdf

1、目的:
　　國醫(yī)大師鄧鐵濤教授臨床運用加味補中益氣湯治療重癥肌無力(MG)幾十年，其治療效果十分顯著。本研究以加味補中益氣湯方為例，采用數(shù)據(jù)挖掘、確定靶標、建立數(shù)據(jù)庫和虛擬篩選的現(xiàn)代計算機方法，研究加味補中益氣湯對MG的治療作用。并在君臣佐使中，找到主要針對乙酰膽堿酯酶(AChE)靶標的草藥;對于主要的抗AChE的草藥，發(fā)現(xiàn)抑制AChE化合物的主要骨架結(jié)構(gòu);以及發(fā)現(xiàn)新的AChE抑制劑;從傳統(tǒng)中藥復方得到啟發(fā)，快速找到活性化合物的新

2、方法。
　　方法:
　　1.研究MG發(fā)病機制，確定AChE作為研究靶標，從蛋白數(shù)據(jù)庫中獲得AChE的晶體蛋白結(jié)構(gòu)。
　　2.通過數(shù)據(jù)挖掘建立中藥復方君臣佐使的化學成分數(shù)據(jù)庫和已知的AChE抑制劑的數(shù)據(jù)庫。
　　3.本研究采用了利平斯基五規(guī)則，進行初步的化合物的類藥性篩選。
　　4.采用分子二維(2D)、三維(3D)相似度疊合技術(shù)和Glide分子對接技術(shù)，對中藥復方化學成分進行基于AChE抑制劑配體的虛擬篩選

3、。
　　5.骨架分析，得到潛在的抗AChE活性化合物新骨架，從商業(yè)數(shù)據(jù)庫中購買相同的骨架的化合物。
　　6.酶的活性實驗，以donepezil為陽性對照品，測定24個化合物的IC50值，通過Ellman酶分析實驗，找到了5個活性化合物。
　　7.用分子動力學模擬的方法進行驗證，驗證基于分子對接虛擬篩選預測活性化合物的可靠性。
　　結(jié)果:
　　通過對MG發(fā)病機制的研究，預測AChE該病的主要研究靶標。研究發(fā)現(xiàn)

4、加味補中益氣湯中的抗AChE活性成分主要是黃酮類的化合物，同時，還發(fā)現(xiàn)了一類新的抗AChE的化合物骨架，通過實驗驗證，找到了5個新的AChE抑制劑X4，X10，X11，X19和X21，IC50分別為6.5±0.23μM，11.4±2.72μM，7.1±1.34μM，10.9±0.48μM，2.3±0.15μM。分子動力學模擬表明，預測的結(jié)合自由能△G值與新的AChE抑制劑的生物活性的數(shù)據(jù)是一致的，呈線性關(guān)系。說明通過分子對接篩選活性化合

5、物的技術(shù)的可靠性。這項研究表明，新的活性化合物的發(fā)現(xiàn)可以從中藥材的活性成分骨架中得到啟發(fā)。
　　結(jié)論:
　　本研究的結(jié)論如下:
　　(1)加味補中益氣湯對重癥肌無力具有治療作用，其中君藥和使藥發(fā)揮了主要作用，臣藥和佐藥對重癥肌無力的治療可能具有不同的功能。
　　(2)主要的活性成分是黃酮衍生物類AChE抑制劑。
　　(3)本文發(fā)現(xiàn)了5個新骨架的AChE抑制劑。
　　(4)本文提供新的研究方法，從傳統(tǒng)的