TLR4-MyD88-NF-κB通路介導(dǎo)右美托咪啶減輕大鼠肢體缺血再灌注后肺損傷.pdf

1、目的:建立大鼠單側(cè)下肢缺血再灌注模型，觀察TLR4/MyD88/NF-κB通路在右美托咪定(DEX)預(yù)處理減輕大鼠肢體缺血再灌注后肺損傷中的作用。
　　方法:健康成年雄性SD大鼠28只，體重280-320g，隨機分成4組(n=7):假手術(shù)組（Sham組），缺血再灌注組（I/R組），右美托咪啶預(yù)處理組(DEX組)，右美托咪啶和阿替美唑預(yù)處理組（Atip組）。采用右下肢股部切口，分離股動靜脈，無創(chuàng)動脈夾夾閉股動靜脈，并用橡皮筋以恒定張

2、力結(jié)扎側(cè)支循環(huán)，制備單側(cè)下肢缺血再灌注損傷模型。Atip組:在缺血前30min同時腹腔給予阿替美唑(250ug/kg)和DEX(25ug/kg);DEX組:在缺血前30min給予等體積的DEX和生理鹽水;Sham組和I/R組:在缺血前30min給予相等體積的生理鹽水。缺血3h后移除動脈夾，松開橡皮筋，恢復(fù)血流灌注2h。留取血清、肺組織標(biāo)本，測定大鼠肺濕干重比（W/D值）和肺泡通透性指數(shù)(PPI)，測定支氣管肺泡灌洗液(BALF)總蛋白、

3、IL-1、IL-6、TNF-α的濃度，測定血清IL-1、IL-6、TNF--α的含量，檢測肺組織MPO含量、TLR4、MyD88mRNA表達，測定肺組織NF-κB蛋白的表達水平，光鏡（HE染色）觀察肺組織病理學(xué)變化并行肺損傷評分。
　　結(jié)果:缺血3h，再灌注2h后，I/R組和Atip組W/D值、PPI、總蛋白含量、血清和BALF中IL-1、IL-6、TNF-α的濃度，較Sham組均明顯升高(P＜0.05)，DEX組上述指標(biāo)較I/R

4、組明顯下降（P＜0.05），Atip組上述指標(biāo)與I/R組比較無明顯差異(P＞0.05)。I/R組和Atip組MPO含量較Sham組均明顯升高(P＜0.05)，DEX組MPO含量較I/R組明顯下降（P＜0.05），而Atip組MPO與I/R組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。I/R組和Atip組TLR4和MyD88mRNA表達較Sham組明顯上調(diào)(P＜0.05)，DEX組TLR4和MyD88mRNA表達較I/R組明顯下調(diào)，Atip組T

5、LR4和MyD88mRNA表達與I/R組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05)。Sham組NF-κB電泳條帶吸光度值與內(nèi)參GAPDH電泳條帶吸光度值的比值較小，與Sham組比較，I/R組NF-κB吸光度值與內(nèi)參吸光度值的比值升高(P＜0.05)，與I/R組比較，DEX組NF-κB吸光度值與內(nèi)參吸光度值的比值降低(P＜0.05)，與DEX組比較，Atip組NF-κB吸光度值與內(nèi)參吸光度值的比值明顯升高（P＜0.05）。光鏡下，Sham組肺泡結(jié)構(gòu)

6、完整，無水腫，間質(zhì)未見增厚，僅少量炎性細胞浸潤;與Sham組比較，I/R組和Atip組肺泡結(jié)構(gòu)破壞嚴重，局灶的肺泡塌陷和肺不張，間質(zhì)明顯增厚，間質(zhì)內(nèi)可見大量中性粒細胞、巨噬細胞浸潤，且兩組未見明顯差異;DEX組肺泡清晰可見，結(jié)構(gòu)相對完整，少量的炎癥浸潤及水腫滲出。
　　結(jié)論:大鼠單側(cè)下肢缺血再灌注可引起肺損傷，其發(fā)生機制與NF-κB蛋白表達增強，導(dǎo)致炎性介質(zhì)IL-1、IL-6、TNF-α等的釋放增多有關(guān);右美托咪啶可通過α受體起作