去甲茴三硫抗神經(jīng)炎癥及抗腫瘤藥理活性的研究.pdf

1、目的：神經(jīng)炎癥與小膠質(zhì)細(xì)胞激活在帕金森病發(fā)病機(jī)制中起著非常重要的作用，可能引起多巴胺能神經(jīng)元的損傷和死亡。去甲茴三硫（ADT-OH）是一種能夠釋放H2S的物質(zhì)，H2S是一種重要的氣體信號因子來調(diào)節(jié)腦內(nèi)穩(wěn)態(tài)，有證據(jù)顯示H2S能夠抑制促炎性細(xì)胞因子的表達(dá)。本研究目的在于探究去甲茴三硫是否具有較好的抑制神經(jīng)炎癥及抗腫瘤效應(yīng)，從而能夠?qū)ε两鹕〉闹委熖峁┮欢ǖ慕梃b意義。
　　方法：體外培養(yǎng)小膠質(zhì)細(xì)胞系BV2及多巴胺能神經(jīng)元SH-SY5Y細(xì)

2、胞系，利用LPS的刺激來建立小膠質(zhì)細(xì)胞持續(xù)過度激活模型，對細(xì)胞模型進(jìn)行加藥預(yù)處理，根據(jù)藥物處理的濃度梯度和時間梯度實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定最佳處理時間和有效濃度。采用Weston-blot檢測下游炎癥因子iNOS、COX2蛋白含量的改變，運(yùn)用ELISA檢測細(xì)胞分泌到上清中的促炎性因子IL-6、TNF-α含量的變化。運(yùn)用RT-PCR及Q-PCR檢測一系列炎癥因子轉(zhuǎn)錄水平的變化。此外利用 Weston-blot及免疫熒光染色觀察加藥處理的細(xì)胞模型中 N

3、F-κB通路蛋白的磷酸化水平及核轉(zhuǎn)位現(xiàn)象。利用小膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)基處理SH-SY5Y，通過MTT法，PI染色，流式等來觀察去甲茴三硫是否能夠間接性的保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元。利用MTT法檢測去甲茴三硫是否能夠抑制多種腫瘤細(xì)胞系的活性及增殖，利用流式細(xì)胞儀檢測腫瘤細(xì)胞系細(xì)胞周期的變化。
　　結(jié)果：對小膠質(zhì)細(xì)胞過度激活模型加藥處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明 ADT-OH能夠明顯的抑制LPS引起的BV2激活，并且ADT-OH本身對小膠質(zhì)細(xì)胞狀態(tài)沒有明顯的影

4、響。ADT-OH的預(yù)處理能夠明顯抑制促炎性因子（如iNOS，COX2，IL-6，TNF-α等）的轉(zhuǎn)錄及蛋白水平的增加。Weston-bolt檢測NF-κB通路的IKK及其磷酸化活性和IκB家族蛋白水平，p65及其磷酸化水平的變化，發(fā)現(xiàn)LPS刺激30 min內(nèi)，ADT-OH的處理能夠使IKK的磷酸化水平明顯下調(diào)，同時p65的磷酸化也同樣被抑制。通過免疫熒光觀察到LPS刺激30 min內(nèi)ADT-OH的預(yù)處理能夠明顯抑制LPS引起的p65核轉(zhuǎn)

5、位現(xiàn)象。制備不同處理?xiàng)l件的小膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)基，培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞48 h，PI/Hochest染色結(jié)果與MTT測試結(jié)果均表明ADT-OH能夠通過抑制膠質(zhì)細(xì)胞過度激活引起的神經(jīng)炎癥來間接的對多巴胺能神經(jīng)元起到保護(hù)作用。不同濃度的 ADT-OH處理 HeLa，A549等幾種腫瘤細(xì)胞系24 h或48 h，MTT細(xì)胞活性測試結(jié)果顯示ADT-OH能夠明顯地抑制腫瘤細(xì)胞的活性，同時流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞周期阻滯現(xiàn)象。