人老化椎間盤髓核細胞體外老化模型的建立與細胞老化表型的初探.pdf

1、目的:
　　構建人椎間盤髓核細胞(nucleus pulposus cells，NPCs)老化模型，探討老化NPCs中生長因子的表達差異及其與椎間盤退變(intervertebral disc degeneretion，IDD)的關系。
　　方法:
　　1、體外單層培養(yǎng)人正常NPCs系(ScienCel14800)，連續(xù)1∶2傳代培養(yǎng)，誘導建立NPCs復制性老化(replication senescence cells

2、，RS)模型;
　　2、不同濃度雙氧水作用于未老化NPCs，模擬椎間盤氧化應激微環(huán)境，誘導建立應激誘導過早老化(stress induced premature senescence cells，SIPS)模型;
　　3、細胞衰老β-半乳糖苷酶(Senescence-associatedβ-galactosidase，SA-β-gal)染色檢測NPCs陽性表達率;
　　4、流式細胞儀檢測G1期細胞比例及細胞凋亡率。CC

3、K-8檢測不同代次細胞增殖活性;
　　5、應用Agilent表達譜芯片初步篩選出正常與老化NPCs中差異性表達的生長因子;
　　6、實時熒光定量PCR進一步驗證所篩選生長因子的表達差異。
　　結果:
　　1、NPCs經(jīng)連續(xù)傳代、雙氧水誘導可分別構建RS模型及SIPS模型;
　　2、兩種老化模型的SA-β-Gal陽性表達的細胞比例均高于70％，G1期細胞比例均高于80％，凋亡率均低于10％;
　　3、A

4、gilent表達譜芯片篩選出的堿性成纖維生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)與血管內(nèi)皮生長因子a(Vascular endothelial growth factor a，VEGF-a)在不同老化模型中，表達有顯著性差異(p＜0.05)，特別是bFGF在SIPS模型中的表達顯著高于RS模型(p＜0.05)。兩種老化模型中的bFGF表達量顯著高于正常組(p＜0.05)。
　　結論: