人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與髓核細(xì)胞共培養(yǎng)后的類髓核分化效應(yīng)及其對(duì)髓核細(xì)胞表型的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、背景：
　　 在我國(guó)，大多數(shù)的人在其一生中都有過(guò)腰背痛的經(jīng)歷，腰背痛及其伴隨的脊柱退行性改變成為骨科的常見(jiàn)病，其高額的醫(yī)療花費(fèi)以及對(duì)患者身心所造成的損害，對(duì)個(gè)人和社會(huì)均造成了巨大負(fù)擔(dān)。目前，椎間盤的退行性改變被認(rèn)為是引起腰背痛的首要原因，當(dāng)前臨床上主要通過(guò)保守治療以及手術(shù)治療的方法進(jìn)行干預(yù)治療，但無(wú)論何種方法，都只能對(duì)于已出現(xiàn)的癥狀進(jìn)行對(duì)癥治療，并不能夠從根本上延緩甚至逆轉(zhuǎn)椎間盤退變。目前，針對(duì)椎間盤退變的生物學(xué)修復(fù)的細(xì)胞移植治

2、療為治療這一疾病提供了一種新的思路。其中，通過(guò)移植BMSCs來(lái)延緩、修復(fù)椎間盤退變成為研究熱點(diǎn)。有學(xué)者已經(jīng)在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中證明，體外共培養(yǎng)時(shí)，BMSCs和NPCs的相互作用能促使BMSCs向類髓核表型分化同時(shí)促進(jìn)NPCs分化增殖和特征性物質(zhì)表達(dá)。這為BMSCs移植治療椎間盤退變提供了理論依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)將人BMSCs分別與人正常及退變NPCs進(jìn)行共培養(yǎng)，研究其類髓核分化效應(yīng)及其對(duì)NPCs表型的調(diào)節(jié)作用。
　　 目的：
　　 探討

3、入骨髓問(wèn)充質(zhì)干細(xì)胞分別與正常及退變髓核細(xì)胞共培養(yǎng)后的類髓核分化效應(yīng)及其對(duì)髓核細(xì)胞表型的調(diào)節(jié)作用，并進(jìn)行比較。
　　 方法：
　　 分別取來(lái)源于腰椎退變病人以及脊柱側(cè)彎病人的間盤組織，通過(guò)改良Pfirrmann法對(duì)其退變程度進(jìn)行分級(jí)，進(jìn)行髓核細(xì)胞(nucleus pulposus cells，NPCs)的分離培養(yǎng)及鑒定，通過(guò)術(shù)中椎弓根釘?shù)廊⊙?，?duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow-drived mesenchymal

4、 stem cells，BMSCs)分離培養(yǎng)并進(jìn)行鑒定。取傳至第三代細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)。建立5個(gè)培養(yǎng)組：BMSCs單獨(dú)培養(yǎng)組，退變NPCs單獨(dú)培養(yǎng)組，正常NPCs單獨(dú)培養(yǎng)組，BMSCs與退變NPCs共培養(yǎng)組，BMSCs與正常NPCs共培養(yǎng)組。選用去掉掛臂的transwell小室來(lái)進(jìn)行細(xì)胞共培養(yǎng)，其小室的底部為聚碳酸酯透水膜（孔隙0.4μm），這使BMSCs分泌的一些因子能夠通過(guò)半透膜起作用，同時(shí)半透膜的存在，又能將兩種細(xì)胞分隔開(kāi)來(lái)，利于細(xì)胞

5、的觀察以及之后細(xì)胞的分離和結(jié)果的檢測(cè)。共培養(yǎng)7天后，RT-PCR法檢測(cè)各組細(xì)胞SOX-9、聚集蛋白聚糖Aggrecan與Ⅱ型膠原蛋白的mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 相較于BMSCs單獨(dú)培養(yǎng)組，共培養(yǎng)組BMSCs的SOX-9、Aggrecan與Ⅱ型膠原蛋白的mRNA表達(dá)均有明顯增加(p＜0.05)。同時(shí)與BMSCs與正常NPCs共培養(yǎng)組相比，BMSCs與退變NPCs共培養(yǎng)組BMSCs的SOX-9、Aggrecan與Ⅱ

6、型膠原蛋白的mRNA表達(dá)均有明顯增加(p＜0.05)。與退變NPCs單獨(dú)培養(yǎng)組相比，共培養(yǎng)組退變NPCs的SOX-9、Aggrecan與Ⅱ型膠原蛋白的mRNA表達(dá)均明顯增加(p＜0.01)。與正常NPCs單獨(dú)培養(yǎng)組相比，共培養(yǎng)組正常NPCs的SOX-9、Aggrecan與Ⅱ型膠原蛋白的mRNA表達(dá)均明顯增加(p＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1.BMSCs與NPCs共培養(yǎng)時(shí)的相互作用能促使BMSCs向類髓核表型分化，