富血小板血漿對光老化人皮膚成纖維細胞體外增殖的影響.pdf

1、目的：探索人皮膚成纖維細胞（HDFs）體外分離及培養(yǎng)的方法，利用長波紫外線（UVA）照射誘導，體外建立HDFs光老化模型，進而觀察不同濃度的富血小板血漿（PRP）對光老化HDF增值的影響，探索較適宜的PRP作用濃度，為PRP在皮膚年輕化方向的臨床應用，提供一定的理論基礎。
　　方法：
　　1、利用組織塊法分離、培養(yǎng)HDFs，不同能量值的UVA照射處于對數(shù)生長期的第三代HDFs，根據(jù)老化細胞比率選定較適宜照射能量值，對細胞進行

2、光老化誘導。老化相關(guān)β－半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色試劑盒[17-20]和流式細胞術(shù)[22]分別對照射組和未照射組細胞進行老化染色及細胞周期的檢測來確定光老化細胞模型的成功建立。
　　2、采取二次離心法提取人血PRP，利用含不同濃度PRP的完全培養(yǎng)基對光老化的HDFs進行分組培養(yǎng)，在加入PRP后的1d、3d、5d、7d，分別利用CCK-8試劑盒及酶標儀測定各組老化HDFs的增殖情況。根據(jù)加入PRP濃度的不同，實驗分為0％PR

3、P組、1%PRP組、5%PRP組、10%PRP組、15%PRP組。
　　結(jié)果：
　　1、組織塊貼壁后7-8d即可觀察到大量成纖維細胞自組織塊邊緣爬出，細胞傳至第三代時，即可見形態(tài)規(guī)則、分布均勻的成纖維細胞。
　　2、不同能量值的UVA照射成纖維細胞，均可使老化細胞數(shù)量增加，當照射能量值達到20 J/cm2時，大量細胞出現(xiàn)凋亡。UVA15 J/cm2照射組，SA-β-gal染液及細胞核 DAPI熒光染液雙染細胞約占總細胞

4、數(shù)的77.65%；未照射組，雙染細胞約占10.24%，兩組數(shù)據(jù)有統(tǒng)計學差異；流式結(jié)果提示，未照射組，G1期**細胞所占比例為（60.15±0.22）%，G2/M期*的細胞所占比例（17.90±0.32）%，15J/cm2UVA照射組，處于G1期**的細胞所占比例呈明顯增多,為（92.34±0.31）%，同時處于G2/M期*的細胞所占比例呈明顯下降，為（6.53±0.12）%。兩組數(shù)據(jù)有統(tǒng)計學差異。
　　3、與0%PRP組相比，其余

5、各濃度組的OD值均增加。5%及10%PRP組OD值增幅較其余組更為明顯。
　　結(jié)論：
　　1、成纖維細胞老化比率與UVA照射強度程正相關(guān)，UVA能量值越大細胞老化比率越高，照射能量超過20 J/cm2時，大量細胞凋亡。
　　2、15 J/cm2的UVA為較適宜的輻照能量，經(jīng)其誘導可成功建立人皮膚成纖維細胞的光老化模型。
　　3、不同濃度的PRP對老化HDFs的增值均具有促進作用，其中5%及10%濃度較為理想實驗濃