基于髓核細(xì)胞新定義表型骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向類髓核細(xì)胞分化的體外研究.pdf

1、背景:椎間盤退變是腰痛的主要原因，其機(jī)制尚不明確。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞作為種子細(xì)胞用于改善甚至修復(fù)椎間盤退變在國內(nèi)外體外及體內(nèi)研究中發(fā)現(xiàn)具有可行性。既往用SOX9、Ⅱ型膠原、蛋白聚糖作為髓核細(xì)胞的特異性表型。2014年美國骨科研究學(xué)會(huì)脊柱組提出新的髓核細(xì)胞的特異性表型，本研究基于髓核細(xì)胞細(xì)胞新的特異性表型，研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向髓核細(xì)胞分化的可能性。
　　目的:對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和髓核細(xì)胞進(jìn)行體外的分離、傳代培養(yǎng)和觀察，用不同濃度

2、髓核細(xì)胞培養(yǎng)基誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞，模擬非接觸性共培養(yǎng)，基于目前髓核細(xì)胞的新定義表型，比較誘導(dǎo)后的間充質(zhì)干細(xì)胞和髓核細(xì)胞相關(guān)表型。
　　方法:取健康6周齡Sprague-Dawley(SD)大鼠股骨、脛骨和尾椎椎間盤，組織貼壁法分離和傳代培養(yǎng)長骨骨髓腔內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞和椎間盤內(nèi)髓核細(xì)胞;倒置顯微鏡觀察間充質(zhì)干細(xì)胞和髓核細(xì)胞原代及傳代后的形態(tài)變化;流式細(xì)胞術(shù)鑒定間充質(zhì)干細(xì)胞;用不同濃度髓核細(xì)胞培養(yǎng)基誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞7d;以普通培養(yǎng)基培養(yǎng)的

3、髓核細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞為對照，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測髓核細(xì)胞和誘導(dǎo)后的間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞表型之間的差異，檢測細(xì)胞表型為:HIF-1α、GLUT-1、蛋白聚糖、Ⅱ型膠原、SHH、Brachyury(T)、Krt8、Krt18、Krt19、CA12、CD24。
　　結(jié)果:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中CD29、CD44陽性表達(dá)、CD45陰性表達(dá)。髓核細(xì)胞中HIF-1α、GLUT-1、Acan、Col2、SHH、Brachyury、Krt8、Krt1

4、8、Krt19、CA12、CD24陽性表達(dá)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR顯示相比于髓核細(xì)胞，未處理的間充質(zhì)干細(xì)胞低氧誘導(dǎo)因子HIF-1α、GLUT-1、Acan、Col2、SHH、Brachyury、Krt8、Krt18、Krt19、CA12、CD24未見明顯表達(dá)。加入50％髓核細(xì)胞培養(yǎng)基的間充質(zhì)干細(xì)胞中細(xì)胞HIF-1α、GLUT-1、Acan、Col2、SHH、Brachyury、Krt8、Krt18、Krt19、CA12、CD24表達(dá)上調(diào)。加