基于譜效關(guān)系頭花蓼抗菌作用的物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的：研究頭花蓼化學(xué)成分及其在大鼠尿液代謝產(chǎn)物與治療泌尿系統(tǒng)感染的譜效關(guān)系，闡明頭花蓼治療泌尿系統(tǒng)感染的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　方法:
　　（1）采用不同溶劑制備頭花蓼提取物，考察其大鼠尿液代謝物對(duì)常見泌尿系統(tǒng)感染菌的藥效，確定藥材提取方案。并采用D101大孔樹脂分離手段從最佳藥效提取物-水提醇沉提取物中制備頭花蓼各組分。
　?。?）采用MCI柱層析將80％乙醇組份分為Frac.A～F六個(gè)組份，并利用 UHPLC-UV技術(shù)

2、建立各組分的指紋圖譜；采用均勻設(shè)計(jì)，將Frac.A～F配置成不同配比的22個(gè)樣品，考察其對(duì)泌尿系統(tǒng)主要感染菌大腸埃希菌的最低抑菌濃度（MIC），運(yùn)用灰色關(guān)聯(lián)度法分析色譜峰與抑菌活性的相關(guān)性，確定頭花蓼體外抑菌作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　（3）對(duì)健康SD大鼠采用口服給予頭花蓼有效組分,收集其尿液為供試品，經(jīng)UHPLC-ESI-Q-TOF MS采集數(shù)據(jù)后，采用傳統(tǒng)代謝產(chǎn)物分析法和代謝組學(xué)分析法對(duì)含藥尿液的代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析。
　?。?）

3、以大鼠口服頭花蓼提取物后尿液的抑菌效價(jià)為應(yīng)變量，相應(yīng)尿液UHPLC-ESI-Q-TOF MS色譜峰為自變量，采用隨機(jī)森林回歸分析建立尿液譜效關(guān)系，探討尿藥的移行成分與抗菌活性的相關(guān)性，明確頭花蓼體內(nèi)治療泌尿系統(tǒng)感染的作用物質(zhì)。
　　結(jié)果：
　?。?）通過考察不同提取方法的頭花蓼提取物的藥效，確定了水提醇沉為制備頭花蓼提取物的方案。利用D101大孔樹脂，將有效提取物分為3個(gè)具有較好分離度的組分（水組分、80%乙醇組分及95乙醇

4、組分），體外抑菌活性結(jié)果顯示80%乙醇組分活性最佳，而經(jīng)體內(nèi)代謝后水組分與80%乙醇組分的含藥尿液藥效相當(dāng)。
　　（2）運(yùn)用灰色關(guān)聯(lián)度法建立的體外譜效關(guān)系表明，頭花蓼抑菌作用是其多個(gè)化學(xué)成分共同作用的結(jié)果；其中色譜峰沒食子酸、表兒茶素、兒茶素、蘆丁、槲皮素、和槲皮素-3-O-(2―-O-沒食子酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷與抑菌活性的關(guān)聯(lián)度最大（>0.8），表明這些成分是頭花蓼發(fā)揮抑菌作用的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　（3）采用傳統(tǒng)代

5、謝產(chǎn)物分析方法從尿液中檢測(cè)到24個(gè)移行成分，基本明確了頭花蓼在尿液中的主要移行成分主要以沒食子酸和槲皮素的代謝產(chǎn)物為主。采用代謝組學(xué)分析方法，發(fā)現(xiàn)544個(gè)峰的VIP值在1以上，表明這些峰為移行成分。以含量從高到低進(jìn)行排列，得到前48個(gè)主要移行成分色譜峰，并指認(rèn)了其中的35個(gè)代謝產(chǎn)物。
　　（4）通過隨機(jī)森林法確定了含藥尿液中與藥效相關(guān)的50個(gè)化合物,譜效關(guān)系表明頭花蓼發(fā)揮藥效的不僅僅是其代謝產(chǎn)物，也是其通過進(jìn)入體內(nèi)后影響體內(nèi)代謝，