蒲公英和甘草代謝物的抗腫瘤活性物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、目前,臨床上針對(duì)乳腺癌和宮頸癌的主要治療方法有化療、放療和手術(shù)治療。手術(shù)治療對(duì)病人的正常生活影響較大,化療和放療一定程度上可以發(fā)揮治療作用,但其耐藥性和毒副作用往往導(dǎo)致治療無(wú)法繼續(xù)進(jìn)行。傳統(tǒng)中藥具有多作用靶點(diǎn),毒副作用低等優(yōu)點(diǎn),可以有效避免耐藥性的產(chǎn)生。建立全面反映中藥活性的方法,將更加有效地體現(xiàn)中藥成分的整體性和綜合作用,從而對(duì)更好地評(píng)價(jià)中藥的質(zhì)量具有深遠(yuǎn)的理論意義和現(xiàn)實(shí)意義。
　　基于進(jìn)入體內(nèi)的化學(xué)成分通過(guò)代謝最終排入尿和膽汁

2、,本研究采用中藥直接作用物質(zhì)基礎(chǔ)理論的研究思路,以口服蒲公英和甘草提取液后的大鼠尿液為研究對(duì)象,以MCF-7人乳腺癌細(xì)胞和Hela宮頸癌細(xì)胞為考察對(duì)象,結(jié)合 MTT法、PI單染法考察了蒲公英和甘草的體內(nèi)直接作用物質(zhì)對(duì)細(xì)胞的增殖和周期的影響;綜合應(yīng)用多種現(xiàn)代分離技術(shù),分析含藥尿液及其抗乳腺癌活性部分,闡明蒲公英和甘草在體內(nèi)的直接作用物質(zhì)和其抗乳腺癌的物質(zhì)基礎(chǔ)。具體內(nèi)容分為以下三個(gè)部分:
　　1.用含藥尿液作為藥物源加入離體反應(yīng)系統(tǒng)中

3、,采用MTT法對(duì)蒲公英和甘草的含藥尿?qū)CF-7乳腺癌細(xì)胞和Hela宮頸癌細(xì)胞的抑制活性進(jìn)行了考察。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),蒲公英和甘草的提取物在體內(nèi)均具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖的活性。并且采用PI單染法考察了大鼠含藥尿?qū)CF-7乳腺癌細(xì)胞和Hela宮頸癌細(xì)胞周期的影響。結(jié)果顯示兩種癌細(xì)胞均被蒲公英提取物的含藥尿阻滯在G2/M期。甘草提取物使MCF-7細(xì)胞的S期和G2/M期增加,G1期減少。
　　2.利用超高效液相色譜-四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜,對(duì)大

4、鼠灌胃給藥后體內(nèi)蒲公英和甘草提取物的吸收成分、代謝物鑒定進(jìn)行了初步探索。將中藥提取液和大鼠尿液用甲醇提取后,采用UPLC-Q-TOF電噴霧正、負(fù)離子模式,對(duì)蒲公英和甘草的提取物、空白尿樣和灌胃后的大鼠尿樣進(jìn)行定性分析。蒲公英水提物中共檢測(cè)到78個(gè)質(zhì)譜峰,含藥尿中檢測(cè)到蒲公英的13個(gè)質(zhì)譜峰;甘草水提物和醇提物共檢測(cè)到62個(gè)質(zhì)譜峰,含藥尿中檢測(cè)到甘草的25個(gè)質(zhì)譜峰,并且借助Metabolynx分析了代謝產(chǎn)物。
　　3.綜合應(yīng)用現(xiàn)代分離

5、技術(shù),進(jìn)一步篩選蒲公英水提液在體內(nèi)具有抗腫瘤活性的原型成分或代謝產(chǎn)物。使用高效液相色譜對(duì)蒲公英水提液含藥尿進(jìn)行分段,分段后的尿液采取 MTT方法進(jìn)行抗腫瘤活性篩選,對(duì)具有顯著抑制MCF-7細(xì)胞增殖的分段含藥尿進(jìn)行GC-MS分析。研究發(fā)現(xiàn),經(jīng) HPLC分段后的第5、第6和第12段蒲公英含藥尿?qū)CF-7細(xì)胞的抑制率最高,通過(guò)GC-MS分析,在這三段中共有22個(gè)入血成分和代謝產(chǎn)物。經(jīng)分析蒲公英萜醇和羽扇豆醇很有可能是蒲公英提取物中抑制MCF