壯觀鏈霉菌非大觀霉素抑菌組分的分離純化與鑒定.pdf

1、壯觀鏈霉菌(Streptomyces spectabilis)LXR1H-8是通過基因組重排技術(shù)和傳統(tǒng)誘變相結(jié)合的方法選育的突變菌株,多次發(fā)酵驗證,其發(fā)酵液的抑菌活性顯著提高且抑菌譜發(fā)生變化。
　　 本文采用樹脂分離和乙酸乙酯萃取的方法對發(fā)酵液中的抑菌組分粗提取,并研究了pH值對樹脂吸附和萃取的影響,洗脫劑及濃度的選擇;乙酸乙酯4 L萃取洗脫液3次,濃縮蒸干獲得2.00 g棕色粗提物,用甲醇溶解樣品上柱吸附,MCI柱色譜分離粗提

2、物獲得4個部分A、B、C和D,洗脫液為甲醇-水(20:80至80:20),其中A、B部分無抑菌活性,C和D部分有抑菌活性。采用硅膠柱色譜分離C(860mg)獲得4個有抑菌活性的部分C1、C2、C3和C4,洗脫液為氯仿-甲醇(16:1至10:1),采用薄層層析和管碟法(指示菌為Sarcina lutea)跟蹤C1中的抑菌組分,樣品C1經(jīng)凝膠HW-40C柱色譜、RP-18柱色譜分離,半制備液相Sepax Biol-C18(5μm,250×3

3、0 mmψ)純化,洗脫液為甲醇-水(48:52)。減壓濃縮除去溶劑獲得1.3 mgⅡa-1和3.3 mgⅡα-2°利用硅膠柱色譜分離C2,洗脫液石油醚-丙酮(1:1),凝膠HW-40C株層析純化C2,洗脫液為甲醇。采用生物自顯影方法和薄層層析的方法跟蹤C2中的抑菌組分,最后獲得Cv23.00 mg。樣品Ⅱa-2進行1D NMR和2D NMR分析;樣品Cv2進行1D NMR分析,兩個樣品均進行液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)分析。
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