FHL2在小鼠卵巢中的表達(dá)和定位及對(duì)卵泡顆粒細(xì)胞的調(diào)控作用研究.pdf

1、FHL2(four and a half LIM domains protein2)屬于LIM-Only蛋白家族中的一員，可以與不同的蛋白因子互作，作為轉(zhuǎn)錄共調(diào)節(jié)子參與調(diào)控基因表達(dá)、細(xì)胞的增殖分化、細(xì)胞遷移和凋亡等諸多生理調(diào)節(jié)過(guò)程。FHL2在卵巢組織中表達(dá)，誘導(dǎo)性腺向卵巢分化，并參與調(diào)控抑制素基因的表達(dá)。但FHL2在小鼠卵巢中的表達(dá)定位模式，及對(duì)卵泡顆粒細(xì)胞的增殖、凋亡及類固醇激素分泌調(diào)控作用尚不清楚。
　　為了闡明FHL2在卵巢

2、中的表達(dá)定位規(guī)律及對(duì)卵泡顆粒細(xì)胞的調(diào)控作用，本研究從基因表達(dá)、組織表達(dá)、亞細(xì)胞定位、功能研究等幾方面研究了FHL2對(duì)小鼠卵泡顆粒細(xì)胞的調(diào)控作用。結(jié)果如下:
　　1、FHL2在小鼠卵巢中的表達(dá)與定位(1)在不同日齡(7d、14d、21d、28d)的小鼠卵巢中，應(yīng)用RT-PCR的方法證明了FHL2在小鼠卵巢中表達(dá)，且在不同日齡小鼠卵巢中表達(dá)量沒(méi)有差異;
　　(2)免疫組化結(jié)果表明，F(xiàn)HL2在小鼠卵巢中主要定位于卵泡顆粒細(xì)胞和基質(zhì)

3、細(xì)胞中，在各個(gè)時(shí)期卵泡中表達(dá)量差異不大。
　　(3)細(xì)胞免疫熒光結(jié)果表明，F(xiàn)HL2在小鼠卵泡顆粒細(xì)胞亞細(xì)胞定位于細(xì)胞核。
　　2、FHL2干擾對(duì)卵泡顆粒細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡及分泌功能的影響(1)卵泡顆粒細(xì)胞轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒72h后，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組中正常細(xì)胞比例顯著高于對(duì)照組（91.52±0.78 vs85.78±0.14，P＜0.05），細(xì)胞晚期凋亡率也顯著低于對(duì)照組（4.18±0.16 vs10.18±1

4、.81，P＜0.05），凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2顯著上調(diào)，Bax和Caspase-3表達(dá)水甲顯著下調(diào)，說(shuō)明干擾后顆粒細(xì)胞的存活能力提高。
　　(2)利用流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期，發(fā)現(xiàn)FHL2干擾組處于S期顆粒細(xì)胞比例顯著多于對(duì)照組(36.83±0.40 vs24.02±0.33，P＜0.05)，處于G1期的細(xì)胞比例顯著低于對(duì)照組（48.31±1.02 vs62.96±0.72，P＜0.05），周期相關(guān)蛋白Cyclin E和Cyclin

5、B表達(dá)水平顯著提高，P21表達(dá)水平顯著下調(diào)，干擾后影響了顆粒細(xì)胞的有絲分裂過(guò)程;
　　(3)應(yīng)用MTT檢測(cè)轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒后的小鼠卵巢顆粒細(xì)胞增殖情況，結(jié)果表明，相對(duì)于對(duì)照組，F(xiàn)HL2干擾組細(xì)胞活力顯著增加(53.60％ vs15.43％，48h，P＜0.05;109.86％ vs33.33％，72h，P＜0.05)，干擾后顯著促進(jìn)了顆粒細(xì)胞的增殖;
　　(4)應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后顆粒細(xì)胞類固醇分泌水平，結(jié)果表明，相對(duì)于

6、對(duì)照組，F(xiàn)HL2干擾組雌二醇（8.19±0.19 vs2.53±0.41，ng/L，P＜0.01）和孕酮水平（13.96±1.07 vs1.64±0.08，ng/mL，P＜0.01）顯著升高。
　　本課題研究了FHL2在小鼠卵巢組織及卵泡顆粒細(xì)胞亞細(xì)胞中的表達(dá)定位，發(fā)現(xiàn)FHL2在不同日齡的小鼠卵巢中表達(dá)量沒(méi)有差異，且主要定位于卵泡顆粒細(xì)胞的細(xì)胞核中，在不同發(fā)育階段卵泡中表達(dá)量差異不大。進(jìn)一步研究FHL2對(duì)顆粒細(xì)胞調(diào)控作用，結(jié)果表明