白藜蘆醇影響核仁功能及其分子機(jī)制的研究.pdf

1、研究目的:
　　初步探討白藜蘆醇（resveratrol，簡(jiǎn)稱Res）對(duì)核仁功能的影響和其如何通過(guò)PI3K/Akt這個(gè)信號(hào)通路來(lái)影響核仁功能的。
　　方法和結(jié)果:
　　1.通過(guò)MTT、細(xì)胞克隆形成和DAPI染色技術(shù)檢測(cè)Res對(duì)細(xì)胞增殖率、克隆形成和細(xì)胞凋亡的影響，結(jié)果表明100μ mol/L的Res作用48h即可以抑制HeLa細(xì)胞的增殖和克隆形成，并在400μ mol/L及其以上濃度時(shí)完全抑制HeLa細(xì)胞的增殖和克隆形

2、成。
　　2.通過(guò)Luciferase Assay技術(shù)、CHIP技術(shù)和Realtime PCR技術(shù)檢測(cè)Res對(duì)HeLa細(xì)胞內(nèi)rDNA啟動(dòng)子活性、HeLa細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子在rDNA上的富集倍數(shù)和pre-rRNA表達(dá)的影響，結(jié)果表明:Res作用3h后即可抑制HeLa細(xì)胞內(nèi)rDNA啟動(dòng)子活性;Res作用12h后，隨著濃度的增加，轉(zhuǎn)錄因子UBF和RNA聚合酶Ⅰ的亞基RPA194在rDNA上的富集倍數(shù)逐漸降低，換言之，即轉(zhuǎn)錄因子UBF和RNA

3、聚合酶的亞基RPA194的活性降低;12h后對(duì)pre-rRNA的表達(dá)量相對(duì)不加藥組抑制率達(dá)70％左右，并呈現(xiàn)濃度和時(shí)間依賴趨勢(shì)。
　　3.通過(guò)Western Blotting技術(shù)檢測(cè)Res對(duì)和PI3K/Akt信號(hào)通路上的主要成員的表達(dá)及活化情況，結(jié)果表明:隨著濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，HeLa細(xì)胞內(nèi)PI3K/Akt這個(gè)信號(hào)通路上主要成員UBF和Akt的表達(dá)無(wú)較大改變，但其活化水平顯著降低，并呈現(xiàn)濃度和時(shí)間依賴趨勢(shì);與抑制劑PI3

4、Kα、PI3Kβ和Ly294002抑制效果的結(jié)果比較表明:抑制劑PI3Kα的抑制效果最好，這就說(shuō)明PI3K/Akt信號(hào)通路上的，起主要作用的是啟始位點(diǎn)的PI3Kα亞型。
　　4.通過(guò)Luciferase Assay技術(shù)、CHIP技術(shù)、Realtime PCR技術(shù)和WesternBlotting技術(shù)檢測(cè)Res對(duì)PI3Kα亞型活化后的HeLa細(xì)胞的影響，結(jié)果表明:Res可以抑制PI3K/Akt信號(hào)通路活化后rDNA啟動(dòng)子的活性，降低R

5、NA聚合酶Ⅰ的亞基RPA194的活性，下調(diào)pre-rRNA的表達(dá)，抑制PI3K/Akt這個(gè)信號(hào)通路上主要成員UBF和Akt的活化。
　　結(jié)論:
　　Res能有效抑制HeLa細(xì)胞的增殖并促進(jìn)HeLa細(xì)胞的凋亡，降低rDNA啟動(dòng)子的活性，降低轉(zhuǎn)錄因子UBF和RNA聚合酶Ⅰ的亞基RPA194的活性，下調(diào)pre-rRNA的表達(dá)水平，降低PI3K/Akt信號(hào)通路中UBF與Akt的磷酸化水平，對(duì)完全活化的PI3Kα亞型亦有明顯的抑制作用