香連化濁解毒方對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織NF-κB、COX-2mRNA表達(dá)影響的實驗研究.pdf

1、目的：通過觀察香連化濁解毒方對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的一般狀況、疾病活動指數(shù)評分、結(jié)腸黏膜組織病理學(xué)改變以及結(jié)腸組織中NF-ΚB、COX-2 mRNA表達(dá)的影響，試圖從分子水平探討該方治療潰瘍性結(jié)腸炎的作用機(jī)理，為本方在臨床應(yīng)用中提供實驗依據(jù)。
　　方法：將60只健康Wistar雄性大鼠（體重200g-250g）適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分成6組，分別為：正常組（NG），模型組（MG），香連化濁解毒方高劑量組(HDG)、香

2、連化濁解毒方中劑量組(MDG)、香連化濁解毒方低劑量組(LDG)，柳氮磺吡啶組(SASP)，每組10只。除 NG之外，其余的五組大鼠均采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)／乙醇聯(lián)合造模法誘導(dǎo)UC大鼠模型，造模成功后，各中藥治療組給予相應(yīng)劑量的中藥灌胃，SASP予柳氮磺吡啶混懸液灌胃，MG大鼠予等量生理鹽水灌胃，NG大鼠正常喂養(yǎng)。觀察每組大鼠的精神狀態(tài)、飲食水量、糞便性狀、體重變化等一般情況，記錄并測算各組大鼠DAI評分。連續(xù)灌胃2周

3、后，解剖大鼠，觀察結(jié)腸黏膜大體觀及其組織病理學(xué)改變，應(yīng)用RT-PCR法測定結(jié)腸組織中NF-κB、COX-2 mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴NG大鼠大便正常，成黑色顆粒狀，活動敏捷，主動覓食，被毛光澤，體重漸增。與NG相比，其余5組大鼠造模后逐漸出現(xiàn)大便稀軟，甚至出現(xiàn)膿血便，墊料污濁，精神萎靡，喜弓背扎堆，被毛凌亂無光澤，進(jìn)食及活動明顯減少，形體日漸消瘦，其中MG大鼠一般情況最差。實驗結(jié)束時，NG大鼠一般情況良好，MG大鼠一般情況恢

4、復(fù)最差，4組治療組的大鼠大便、精神情況、被毛色澤、進(jìn)食水與體重等狀況均較前好轉(zhuǎn)：HDG和SASP大鼠一般情況好轉(zhuǎn)最為明顯；MDG大鼠一般情況次于HDG組，但好于LDG；LDG大鼠的一般狀況稍好于MG。⑵NG評分為0，HDG（0.37±0.35）、MDG（0.90±0.32）、LDG（1.50±0.62）、SASP（0.63±0.35）與MG（2.50±0.47）比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）， HDG與MDG、LDG比較，差異有

5、統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）, SASP與HDG比較，差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），SASP與MDG比較，差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），SASP與LDG比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），MDG與LDG比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。⑶NG大鼠結(jié)腸黏膜肉眼下未見充血水腫，柔韌光滑，皺襞清晰完整。HE染色后鏡下觀察未見炎性細(xì)胞，未及糜爛、潰瘍形成。MG大鼠結(jié)腸黏膜肉眼下可見彌漫性充血水腫，散在糜爛、潰瘍，質(zhì)脆。HE染

6、色后鏡下觀察正常的結(jié)腸黏膜結(jié)構(gòu)被破壞，大量炎性細(xì)胞浸潤及紅細(xì)胞滲出。其余4組治療組大鼠肉眼下結(jié)腸黏膜較MG均有所改善，HDG和SASP兩組大鼠黏膜情況改善最為明顯，與NG大鼠黏膜接近，MDG次之， LDG次于MDG但優(yōu)于MG。HE染色后鏡下觀察各組黏膜情況與肉眼觀察基本一致。⑷各治療組NF-κB mRNA的表達(dá)均高于NG（0.21±0.03），且低于MG（0.58±0.04），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；HDG（0.29±0.05

7、）的 NF-κB mRNA表達(dá)均低于 SASP（0.35±0.04）、MDG（0.41±0.05）和 LDG（0.50±0.06）三組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；SASP的NF-κB mRNA的表達(dá)低于 MDG、LDG，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；MDG的 NF-κB mRNA表達(dá)低于LDG，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。說明各治療組藥物均可以降低NF-κB mRNA的表達(dá)量，且HDG優(yōu)于SASP、MDG、LDG三組。

8、各治療組COX-2 mRNA的表達(dá)均高于NG（0.33±0.06），且低于MG（0.76±0.06），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；HDG（0.48±0.06）同SASP（0.46±0.06）比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）,且兩組均低于 MDG（0.55±0.06）和LDG（0.64±0.06），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；MDG的COX-2mRNA表達(dá)低于LDG，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。說明各治療組藥物均可

9、以降低COX-2mRNA的表達(dá)量，HDG和SASP無明顯差異，且優(yōu)于MDG、LDG兩組。
　　結(jié)論：①香連化濁解毒方能夠有效緩解UC大鼠腹瀉、便血等一般情況，改善結(jié)腸黏膜充血、水腫等病理表現(xiàn)，促進(jìn)結(jié)腸黏膜糜爛及潰瘍的修復(fù)。其療效和中藥劑量成一定的量-效關(guān)系。②香連化濁解毒方治療UC的機(jī)理可能是通過降低NF-κB、COX-2mRNA的表達(dá)，從而下調(diào)復(fù)雜的促炎因子網(wǎng)絡(luò)，抑制炎癥的連鎖反應(yīng)，減輕腸道炎性反應(yīng)和免疫反應(yīng)，進(jìn)而達(dá)到治療UC的