田薊苷抑制人肺腺癌增殖的作用及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、維藥香青蘭是新疆地區(qū)特色藥材，目前以香青蘭為原料的藥物制劑“益心巴迪然吉布亞顆?！币焉鲜?，研究證明香青蘭具有明確的抑制血小板活化、穩(wěn)定血小板功能的作用。而香青蘭發(fā)揮穩(wěn)定血小板功能的作用機(jī)制主要與其香青蘭總黃酮及其單體田薊苷等活性成分有關(guān)。研究表明香青蘭能夠抑制核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化，下調(diào)多種炎性因子、黏附分子及細(xì)胞生長(zhǎng)因子從而發(fā)揮抗血小板聚集、抑制血栓形成及抗內(nèi)皮細(xì)胞活化、抑制其增殖的作用。而NF-κB能夠激活控制細(xì)胞增殖、新生血管形

2、成以及趨化因子和細(xì)胞因子生成的基因，這也是促腫瘤形成的一個(gè)機(jī)制。
　　現(xiàn)代腫瘤學(xué)研究表明，腫瘤血管的生成及由此介導(dǎo)的腫瘤生成、侵襲及轉(zhuǎn)移與內(nèi)皮細(xì)胞及血小板活化、血栓形成聯(lián)系密切。腫瘤誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞及血小板活化和血小板及內(nèi)皮生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的腫瘤生長(zhǎng)及傳播形成了一個(gè)惡性循環(huán)，針對(duì)血小板及內(nèi)皮細(xì)胞的活化和聚集功能的調(diào)節(jié)有可能打破該循環(huán)，維持正常的血液內(nèi)環(huán)境，抑制腫瘤內(nèi)血管新生過(guò)程，發(fā)揮抗腫瘤功效。
　　作為天然藥用植物，香青蘭不僅具

3、有下調(diào)多種黏附分子作用，而且還具有抗炎、抗氧化、抑制鈣離子內(nèi)流等眾多藥理機(jī)制，具有從多環(huán)節(jié)抑制血小板聚集以及抗內(nèi)皮細(xì)胞活化，從而更加穩(wěn)定地發(fā)揮抗血栓形成及抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用的優(yōu)勢(shì)。那么香青蘭的活性單體田薊苷能否通過(guò)這一機(jī)制抑制內(nèi)皮細(xì)胞及血小板的活化，并進(jìn)一步發(fā)揮相應(yīng)的抗腫瘤作用呢？
　　本課題利用體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)及荷瘤裸鼠動(dòng)物模型，通過(guò)分子生物學(xué)及病理學(xué)研究，考察香青蘭總黃酮的活性單體田薊苷通過(guò)調(diào)節(jié)P-selectin影響血小板功能

4、，抑制腫瘤血管生成，從而用于腫瘤防治的可能性，探索香青蘭藥材在抗腫瘤新領(lǐng)域的應(yīng)用前景。
　　1.田薊苷細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)
　　通過(guò)CCK-8檢測(cè)法對(duì)各濃度田薊苷及內(nèi)皮細(xì)胞刺激因子TNF-α對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞EA.hy926的毒性作用進(jìn)行了評(píng)價(jià)，考察了田薊苷及TNF-α的體外細(xì)胞毒性，擬定后續(xù)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的使用濃度:TNF-α以終濃度為25ng/ml的培養(yǎng)體系激活內(nèi)皮細(xì)胞;TIL終濃度為40μg/ml左右的培養(yǎng)體系用以干預(yù)經(jīng)TNF-α激活的

5、內(nèi)皮細(xì)胞。
　　2.田薊苷對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子表達(dá)的影響
　　采用Western Blot實(shí)驗(yàn)法對(duì)田薊苷干預(yù)活化的內(nèi)皮細(xì)胞P-selectin、VEGF和VCAM-1的蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，以考察田薊苷對(duì)哪些內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子具有調(diào)控作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)TNF-α誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)VCAM-1蛋白的情況被田薊苷抑制得最為顯著，對(duì)P-selectin的過(guò)表達(dá)也有輕微抑制作用，而VEGF的表達(dá)量經(jīng) TNF-α的刺激反而略有降低，經(jīng)田薊昔干

6、預(yù)后表達(dá)量更低。
　　3.田薊苷對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子基因調(diào)控的影響
　　采用Real time PCR檢測(cè)法，以GAPDH為內(nèi)參基因，半定量地測(cè)定了VCAM-1、P-selectin及VEGF的mRNA表達(dá)情況，結(jié)果證實(shí)VCAM-1及P-selectin的mRNA表達(dá)變化趨勢(shì)與蛋白層面相一致，田薊苷對(duì)TNF-α刺激后表達(dá)增加的VCAM-1和P-selectin有抑制作用。而VEGF的變化不同于蛋白水平的檢測(cè)，經(jīng)TNF-α刺激后

7、mRNA表達(dá)上調(diào)，田薊苷的干預(yù)抑制了其表達(dá)。
　　4.田薊苷人肺腺癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的研究
　　首先通過(guò)腫瘤組織塊移植法建立人肺腺癌裸鼠移植瘤模型，比較田薊苷與陽(yáng)性對(duì)照藥重組人血管內(nèi)皮抑制素對(duì)裸鼠腫瘤生長(zhǎng)早期的抑制作用，實(shí)驗(yàn)中可觀察到田薊苷組裸鼠腫瘤生長(zhǎng)較為緩慢，腫瘤抑制率高于陽(yáng)性對(duì)照藥組，但結(jié)果不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其次取瘤組織切片進(jìn)行免疫組化染色，測(cè)定P-selectin、 VCAM-1及VEGF水平，并通過(guò)CD34染色水平分析