田薊苷抑制人肺腺癌增殖的作用及其機制的初步研究.pdf

1、維藥香青蘭是新疆地區(qū)特色藥材，目前以香青蘭為原料的藥物制劑“益心巴迪然吉布亞顆粒”已上市，研究證明香青蘭具有明確的抑制血小板活化、穩(wěn)定血小板功能的作用。而香青蘭發(fā)揮穩(wěn)定血小板功能的作用機制主要與其香青蘭總黃酮及其單體田薊苷等活性成分有關(guān)。研究表明香青蘭能夠抑制核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化，下調(diào)多種炎性因子、黏附分子及細(xì)胞生長因子從而發(fā)揮抗血小板聚集、抑制血栓形成及抗內(nèi)皮細(xì)胞活化、抑制其增殖的作用。而NF-κB能夠激活控制細(xì)胞增殖、新生血管形

2、成以及趨化因子和細(xì)胞因子生成的基因，這也是促腫瘤形成的一個機制。
　　現(xiàn)代腫瘤學(xué)研究表明，腫瘤血管的生成及由此介導(dǎo)的腫瘤生成、侵襲及轉(zhuǎn)移與內(nèi)皮細(xì)胞及血小板活化、血栓形成聯(lián)系密切。腫瘤誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞及血小板活化和血小板及內(nèi)皮生長因子誘導(dǎo)的腫瘤生長及傳播形成了一個惡性循環(huán)，針對血小板及內(nèi)皮細(xì)胞的活化和聚集功能的調(diào)節(jié)有可能打破該循環(huán)，維持正常的血液內(nèi)環(huán)境，抑制腫瘤內(nèi)血管新生過程，發(fā)揮抗腫瘤功效。
　　作為天然藥用植物，香青蘭不僅具

3、有下調(diào)多種黏附分子作用，而且還具有抗炎、抗氧化、抑制鈣離子內(nèi)流等眾多藥理機制，具有從多環(huán)節(jié)抑制血小板聚集以及抗內(nèi)皮細(xì)胞活化，從而更加穩(wěn)定地發(fā)揮抗血栓形成及抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用的優(yōu)勢。那么香青蘭的活性單體田薊苷能否通過這一機制抑制內(nèi)皮細(xì)胞及血小板的活化，并進(jìn)一步發(fā)揮相應(yīng)的抗腫瘤作用呢？
　　本課題利用體外細(xì)胞實驗及荷瘤裸鼠動物模型，通過分子生物學(xué)及病理學(xué)研究，考察香青蘭總黃酮的活性單體田薊苷通過調(diào)節(jié)P-selectin影響血小板功能

4、，抑制腫瘤血管生成，從而用于腫瘤防治的可能性，探索香青蘭藥材在抗腫瘤新領(lǐng)域的應(yīng)用前景。
　　1.田薊苷細(xì)胞毒性評價
　　通過CCK-8檢測法對各濃度田薊苷及內(nèi)皮細(xì)胞刺激因子TNF-α對內(nèi)皮細(xì)胞EA.hy926的毒性作用進(jìn)行了評價，考察了田薊苷及TNF-α的體外細(xì)胞毒性，擬定后續(xù)體外細(xì)胞實驗的使用濃度:TNF-α以終濃度為25ng/ml的培養(yǎng)體系激活內(nèi)皮細(xì)胞;TIL終濃度為40μg/ml左右的培養(yǎng)體系用以干預(yù)經(jīng)TNF-α激活的

5、內(nèi)皮細(xì)胞。
　　2.田薊苷對內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子表達(dá)的影響
　　采用Western Blot實驗法對田薊苷干預(yù)活化的內(nèi)皮細(xì)胞P-selectin、VEGF和VCAM-1的蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測，以考察田薊苷對哪些內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子具有調(diào)控作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)TNF-α誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)VCAM-1蛋白的情況被田薊苷抑制得最為顯著，對P-selectin的過表達(dá)也有輕微抑制作用，而VEGF的表達(dá)量經(jīng) TNF-α的刺激反而略有降低，經(jīng)田薊昔干

6、預(yù)后表達(dá)量更低。
　　3.田薊苷對內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子基因調(diào)控的影響
　　采用Real time PCR檢測法，以GAPDH為內(nèi)參基因，半定量地測定了VCAM-1、P-selectin及VEGF的mRNA表達(dá)情況，結(jié)果證實VCAM-1及P-selectin的mRNA表達(dá)變化趨勢與蛋白層面相一致，田薊苷對TNF-α刺激后表達(dá)增加的VCAM-1和P-selectin有抑制作用。而VEGF的變化不同于蛋白水平的檢測，經(jīng)TNF-α刺激后

7、mRNA表達(dá)上調(diào)，田薊苷的干預(yù)抑制了其表達(dá)。
　　4.田薊苷人肺腺癌裸鼠移植瘤生長的研究
　　首先通過腫瘤組織塊移植法建立人肺腺癌裸鼠移植瘤模型，比較田薊苷與陽性對照藥重組人血管內(nèi)皮抑制素對裸鼠腫瘤生長早期的抑制作用，實驗中可觀察到田薊苷組裸鼠腫瘤生長較為緩慢，腫瘤抑制率高于陽性對照藥組，但結(jié)果不具統(tǒng)計學(xué)意義。其次取瘤組織切片進(jìn)行免疫組化染色，測定P-selectin、 VCAM-1及VEGF水平，并通過CD34染色水平分析